Gojenje ošpicam - rdečkam

Video: virolog GP Chervonskaya o rdečkam in davici

Spekter občutljivih celic. Virusni Etiologija rdečke nastavite Hiro in Tasaka leta 1938. Da bi se izolirali in identificirali virus rdečk (1962) se je pri 24 letih. Zato je presenetljivo je bilo, da lahko virus rdečk množijo v mnogih sistemih primarno in kontinuirano celice različnih izvorov (SA Demidov et al., 1968- Parkman e. A., 1964a- Ingalls e. A., 1967- Sordoc, 1971 ).
Replikacija virusa je združljiv z mnogimi vrstami osnovnih in trajnih kultur človeka, opica, zajec, goveda, ptičje in drugega izvora. Vendar le zelo omejeno količino pridelkov je prikazan viden citopatski učinek (CPE) virusa rdečk. Tudi v teh kulturah, v katerih je prikazan CPE, je pogosto odvisno od tehnike kulture, število prehodov vodi virus iz seva celic serije medijev, serumov in t. D. Iz tega razloga za kvantitativno določanje virusa je bil razvit po posredni metodi titracije z uporabo motenj pojav. Slednji temelji na premoženja kultur, okuženih z virusom rdečk pridobiti odpor do superinfekcije veliko heterolognih virusov. Običajno se uporablja za proizvodnjo reakcijo virus, ima izrazito citopatski učinek v tej celični sistem. Najpogosteje je to virus ECHO 11, Coxsackievirus B5 in virus vezikularnega stomatitisa. Prisotnost virusa rdečk v kulturi je soditi po učinku ovira razvoj CPP omogoča virus.
Primarnih kultur celic človeškega izvora virusa stabilna manifestacijskega CPE opazili v kulturi plodnika in ščitničnih celic. Ločena CPE so opazili tudi v osnovnem kultupax pridobljenimi iz tkiva zarodka in odraslega kunca (Norrby, 1969).
Vendar primarne kulture celice niso pogosto uporabljajo za identifikacijo in titracije virusa rdečk, ki ga CPE. Bolj priročno v zvezi s tem so bile presajene celice. Enoslojne kulture te celice so bolj homogena in CPE je prikazana bolj konstanten in jasno. Med celic, opičjih izpeljana je virus CPP rdečk vedno odkrita v presajenih linij AH1, LLC-MK2 in predvsem vero. Virus CPP rdečkam je nenehno kaže v transplantiranih celic, zajec ledvice LLC-RK, RK13 in SIRC zajec roženice (VV Chebotarev, 1971- Norrby, 1969). Pogosto uporablja RK13 celice, ki so bolj pogosto uporabljajo za titracijo virusa ne samo na CPP, ampak tudi plak testom (RG Desyatskova, OG Andzhaparidze, 1968). (Sl. 1). Trenutno najboljši substrati celic za proizvodnjo visoke titre virusnega pripravka in plinskega COP-antigen, kot tudi za titracijo CPE in ploščica testnimi celice presajenega ledvic mladičev hrčkov BHK21 klon 13S, posebno tiste celice. Z uporabo teh celic, zlasti pri uporabi lahko pripravimo virusnih titrov do 10 +8 TTsD5o / ml suspenzije kultur, medtem ko je v drugih virusnih kultur titri celic redko TTsDbo nad 106 / ml. AI Rezepova s ​​sod. (1972) za gojenje in titraciji virusa rdečk ga CPE uporablja diploidnih pljučnih celic človeških zarodkov. CPE v celični kulturi je zaznan na 5-7 dni po okužbi.
Interakcija virusa in celicam in vitro. Značilnosti izbrane ko kultiviramo in vitro virusa rdečk, so šibko izražen citopatski učinek, težnja po tvorbi kronične okužbe in okuženih kultur izraženo odpornost proti superinfekcije z heterolognim virusom.
V večini kultur, CPP virus rdečk celice se ponavadi pojavlja v obliki razpršenega poškodbi enoplastni. Za virusa CPP rdečk ni značilen po kateremkoli celične okrogle degeneracija ali postavitev sincicij. Celice običajno izgubijo svojo normalno obliko, povečanje njihove refrangibility. Del celic tako loči od stekla. V nekaterih primerih napreduje citopatične spremembe, ki vodi do zbijanja in krčenja jedra in poznejše pretrganja celic. V nekaterih celičnih linijah opazili citoplazme vključke bazofilno ali eozinofilnim značaja. virus rdečk CPP, odkrita v RK13 celicah razlikuje od tistega v drugih celičnih kulturah. V tem celičnega sistema hitrim citopatski učinek (v povprečju 40-50 ur), ki je izražen v pojavu fokalnih lezij v eni plasti obliki tako imenovanega mikrofokusov (MB Korolev et al., Od leta 1973 McCarthy, 1969). Za razliko od plakov opazili pri drugih celičnih sistemih in predstavlja uničenje žarišča celic mikrofokusy v RK13 celice predstavljajo proliferirajoče celice mase imajo premer okoli 0,2 mm.
V celičnih kultur, okuženih z virusom krasnuZsy lahko pojavi kronično okužbo (Norrby, 1969). Virus CPP rdečk ni razširil na vse celice, in zato tudi v kulturah, kjer je večina enoplastni čudil ponovno spreminjanje okolja dovolj, da povzroči kronično okužbo. Vztrajnost virusa je opaziti tudi v celicah v popolni odsotnosti vidne CPE. Kronična okužba z virusom rdečk vpliva tako diploidnih in tetraploidne celice. Kronično bile okužene celične kulture dobimo tudi iz tkiv, okuženih z rdečkami zarodka in otrok s simptomi prirojenih rdečk (A. Boue, J. Voio, 1969). Kulture se lahko vzdržuje v stanju kronične okužbe mesecev. Z dolgoročno gojenje celic, kronično okuženih z virusom rdečk LLC-MK2 in diploidnih celic človeških niso opazili nobenih morfoloških sprememb, vendar je v obeh primerih zaznamovala počasnejšo rast v primerjavi z neokuženih kultur. Plotkin sod. (1965a) v kronično okuženih diploidnih celic znatno zmanjšanje števila generacij. Dodatek k kultur kronično okuženih specifičnih protiteles in adamantadina (snov inhibiranje virusne reprodukcije rdečkam) ni imel nobenega vpliva na potek kronične infekcije. Očitno je, da je virus tesno povezan s celico, in se prenaša iz ene generacije v drugo.
Značilno je, da celična kultura okuženih z virusom rdečk in zlasti kronično okuženih kažejo odpornost proti okužbi z drugimi virusi. Spekter viruse, proti kateri upor nastane, zelo širok (Parkman npr. A., 1964a).
Mehanizem odpornosti proti superinfekcije z heterologne virusi, kot tudi narava kronične okužbe še vedno nejasen.
Znano je, da je virus rdečk, pomnoži pri plodu, ki vodi do nastanka različnih razvojnih nepravilnosti. V zvezi s tem je posebnega pomena, je študija o naravi replikacije virusa v kulturah celic človeškega izvora. Kot smo že omenili, v celičnih kulturah, ki izhajajo iz tkivih ploda prizadeti rdečkam običajno odkrijejo kronično okužbo. Kronična okužba lahko enostavno povzroči okužbo z diploidnih celic virus rdečk, ki izhajajo iz različnih organov normalnega človeškega zarodka. Takšne celice lahko neprekinjeno vzdržuje v laboratoriju, vendar je njihova pričakovana življenjska doba je običajno krajša od zunaj okuženih kultur. Treba je tudi opozoriti, da je, ko se lahko virus rdečk in vitro delovanje na diploidnih celic, pridobljenih iz več organov zarodka privede do prenehanja mitoze (A. Voio, J. Voio, 1969). V "novih" celičnih kultur razmnoževanje ustavil 4-8 prehodov, medtem ko je "starih" prenehala vzgojiti 1-2 prehodov po okužbi. Naslednja Plotkin in Vaheri (1967) je pokazala, da pri diploidnih 38 brezžični celic, okuženih z virusom rdečk, se specifične protein proizveden. Ekstrahirajo iz okuženih kultur, ima inhibitorni učinek na mitotične aktivnost normalnih diploidnih celic in je bil imenovan avtorji "Inhibin". "Inhibin" pokazala thermolability in izgubil aktivnost po zdravljenju s posebnimi protivirusnimi protiteles.
Citogenetski študija je pokazala, da v okuženih celičnih kultur diploidna kromosomske aberacije odstotkov višji kot v neokuženih. Tako se je po (A. Boue, J. Voio 1969) v kronično okuženih diploidnih kultur je bil odstotek okvarjenih celic v povprečju 20-25, medtem ko je v običajnih - okoli 10. študije, ki se izvajajo v našem laboratoriju LV Pryanichnikova (1971) z uporabo diploidna celice seva L-58, in različni sevi virusa rdečk, so pokazale, da je bilo število odklonska celic približno 3-krat večja kot pri kronično okuženih kulturah kot pri običajnih narave.
Obstaja pa, verjeli, da so kromosomske aberacije ni posledica neposrednega delovanja virusa v kromosomih, temveč je odvisna od celotnega obolenje.
Kinetika reprodukcije in morfogenezi. V študiji kinetiko virusa rdečk razmnoževanja v celični kulturi presajenega VNK.21 (Vaheri npr. A., 1967) so pokazale, da je mrk fazi približno 12 ur. V zgodnji fazi infekcije večina infekcioznega virusa je bila povezana s celico. V kasnejših fazah razmerja zunajcelične in znotrajcelične virus se je spremenilo v korist prvih. Virusne titre v mediju dosegla vrhunec 48-72 ur.
Ko elektron-mikroskopski študija okuženih kultur (MB Queensu in drugi., Od leta 1973 Holmes e. A., 1969), je bilo ugotovljeno, da je zunajcelični virus začne pojavljati &lsquo-okoli svojih celic po približno štiriindvajset ur po okužbi. Virusne delce sprosti iz celic izključno brstenja in pridobili zunanjo lupino, ki poteka skozi citoplazemske membrane.
Tvorba rdečk viriona bila izvedena na različne načine: pojavila na celični površini votlinic v Golgi kompleksa in včasih direktno v citoplazemske matrici. Razlogi za razširjenost določenega načina oblikovanja so nejasne. Rutinsko identifikacija virione je običajno začel z 2 dni po okužbi. V poznejših obdobjih se je število votlinic v celici močno povečala. Formacija viriona brstenja vedno poteka, v katerem prokariontsko jedro ovojna membrana vakuole ali citoplazmo. Prokariontsko jedro so tesno povezane s celično membrano in vakuole in nikoli niso opazili v obliki agregatov v citoplazmi. Holmes et al. (1969) v pozni fazi okužbe so opazili tudi nenormalnih oblik predstavljajo bolj grobe delce, ki vsebujejo dva ali tri prokariontsko jedro.
Tako tvorba virionov rdečkam pojavi samo v citoplazmi občutljivih celic, kar poudarja podobnosti virusa rdečk arbovirus skupino A.

Video: Rdečke je riba. KiselevSA.