Statistične metode za odkrivanje podedovane Biokemična motnja - praktične spretnosti Pediater

Obstaja približno 500 dedne presnovne bolezni, ki lahko ovirajo normalno rast in razvoj otroka. Diagnoza teh bolezni zunanjih kliničnih znakov ni vedno mogoče. Program biokemične študije za določitev narave dedno napake presnove so zelo kompleksni in se lahko opravlja samo svoje specializirane genetskih laboratorijev. Vendar pa je pri otrocih in ambulantno klinični laboratorijski testi se lahko opravijo prvi stopnji, pomaga zdravniki "presejanje" (prebiranje) otroci s sumom presnovnimi dedna bolezen. Zato iz teh hitrih testov pregledajo vzorce. To je v glavnem kvalitativna preizkus. Otroci s pozitivnimi rezultati na pregledanih vzorcev
so testirali v specializiranih laboratorijih na medicinskih genetskih svetovalnih centrov na programu druge stopnje. Za pojasnitev narave okvare dednega analize kromosomskih se uporabljajo, fizikalne, biokemijske, zlasti metode kromatografije.
Tukaj so najbolj pogosto uporabljajo v praksi pediatričnih preskušanjih v prvi fazi.
Mikrobiološke diagnostične metode. V številnih evropskih in ameriških državah uporabljajo test Guthrie. Hkrati sredo s kulturo B. subtilis dodanih inhibitorjev, zavira rast mikrobov. V navzočnosti v krvi in ​​urina bolnikov z povečanih količin aminokislin (fenilalanin, levcin, histidin in drugi.) Izpadlo inhibitorni učinek inhibitorjev in povečanje rasti mikrob cone.
V naši državi, za ta namen pogosto uporabljajo avksotrofnem sevi VE coli, K-12. Metoda temelji na stimulacijo rasti avksotrofni mutantov povečane količine amino kislin, vsebovanih v krvi in ​​urinu.
Vzorec z 10% raztopino železovega klorida (FeCt3). FeCb reagira z phenylpyruvic, immidazolpirovinogradnoy kislin in drugih spojin. Tako je obarvanje rešitev, narava in intenzivnost, ki kažejo na določene presnovne motnje.
Reagenti: 10% FeCl3 raztopina, 10% raztopina HC1, magnezijev reagent (11 g MgCh, 20 ml koncentrirane NH4OH, 1 l destilirane vode).
Tehnika: 4 ml urina, da se veže fosfat dodamo 1 ml magnezijevega reagenta mešani in 5 minut zatem filtriramo skozi filtrirni papir. Filtrat smo nakisali z 2 kapljici 10% -ne raztopine HC1, nato pa dodamo 3-4 kapljic 10% raztopine FeCh. V 5-7 minut, bodite pozorni na spremembo barve.
Ko fenilketonurija mešanica prejme modro-zelena okrasku- tirozinoze - modro-zeleno, hiter vytsvetayuschuyu- histidinemia - sivo-zelenuyu- v nasprotju absorpcijsko metionina - vijolične barve, ki prehaja rdeče in korichnevuyu- homogentisuria - zeleno, hiter vytsvetayuschuyu- diabetes - rdeče-rjave barve in t. d.
Vzorec je zakonito ketonskih teles. Reagenti: 5% vodno raztopino natrijevega nitroprusida (pripravljen prej tempore), ledoctu, 10% raztopino NaOH.

T f x n in A: do 1 ml urina dodamo dve kapljici 5% raztopine natrijevega nitroprusidom in 0,5 ml 10% NaOH. Nato damo 0,5 ml ledocetne kisline. Mešanico stresamo in upoštevati naravo obarvanje.
V navzočnosti v urinu acetona, acetocetnega, p-hidroksimaslene kisline (ketonska telesa) dajanje nitroprusid daje češnjevo rdeča barva, ki ne izgine z dodajanjem ocetne kisline. Vzorec je pozitiven in rahlo rožnate barve v zadostni zakisljevanje urina.
Vzorcu keto kislino z 2,4-dinitrofenilhidrazinom (2,4-DNPH). J E ct in y: 0,2% raztopina 2,4-DNPH v 2N. HC1, eter, 10% raztopina Na2SOz.
Tehnika: 0,25 ml urina zmešamo z 1 ml 0,2% raztopine 2,4-DNPH, dodamo 10 minut k zmesi enakim volumnom etra, mešani in dekantiramo. Ko se je vsebina epruvete razdeljen na 2 plasti, je zgornji (eter) plast odpipetiramo v svežo cevko in enako količino 10% -ne raztopine №gSOz.
Pri reakciji 2,4-DNPH urin reagira s keto kislinami, pri čemer tvorijo barvanih hydrozones. S pozitivno reakcijo je spodnja karbonat plast obarvana rumeno ali oranžno. Intenzivnost obarvanja se oceni vizualno na lestvici od 0 do + + + +. Ko ima zelo pozitiven vzorec spodnji sloj skoraj rjave (temno oranžna) obarvanost na negativne ostane brezbarvna.
Reakcija je pozitivna za fenilketonurijo, javor bolezni sirupa urina, tirozinoze ali tirozinurii, ahistidasia. Takšno obarvanje lahko tudi na hyperglycinemia in glikogenoza tipa 1, 3, 5, 6 zaradi reakcijo z acetonom.
Preskus mukopolisaharidov z tsetiltrimetilammo-niumbromidom (CTAB ali cetrimid). Reagenti: 2,5% CTAB raztopine v 1 M citratnem pufru, pH 5,75 (pred raztapljanje pufer predgretega CTAB).
Metode priprave citratnega pufra, kot sledi: 1) smo raztopili 210 g citronske kisline (CeHeOzX x H2O) v 500 ml destilirane ravnovesja tekočin 2) Dodamo 150 ml 20 n. NaOH raztopino mešali in ohladili na sobno temperaturno 3) z uporabo potenciometra, je pH pri sobni temperaturi raztopine naravnamo na 5,75
z dodatkom 2U. NaOH- 4) količina reagenta z dodatkom destilirane vode naravnamo na 1 liter.
Tehnika: 5 ml svežega urina dodamo 1 ml 2,5% raztopine CTAB pomešamo. Vzorec je pozitiven, če za 20-30 minut pojavi motna ali puhasto oborino. Reakcija je pozitivna za motnje mukopolisaharidov kot sindromi, Hurler Hunter, Sanfilippo Scheie, kot tudi nekatere druge dednih in ne-dedne bolezni: Marfanov sindrom, artronihodisplazii, multiple exostosis, revmatoidnega artritisa, kretenizem, in drugi.
Test za mukopolisaharidov z toluidinska modro.
Kapljica urina nanesemo z mikropipeto na filtrirni papir, sušimo pri sobni temperaturi, nato potopimo v toluidin reagenta za 1 minuto in sprali v 95% raztopino etanola. S pozitivnim vzorcem mestu je obarvan vijolično-rdeče barve. Kot kontrolo vzporedna da dobimo vzorec urina iz raztopine bolnika ali gargoilizmom hondrointinsulfata A pri koncentraciji 2 mg / ml.
Nitrozonaftolovaya test za tirozinemije. Reagenti: 1) 2,63 n. dušikova kislina, njene priprave volumna koncentrirane dušikove kisline raztopimo v 5 volumnih vodno 2) NaNOz, od katerih 2,5 g raztopimo v 100 ml vodotesen 3) in-nitrozo-naftola, od katerih je 100 mg smo raztopili v 100 ml 25 % raztopino etanola. Vsi reagenti so shranjeni v hladilniku.
Tehnika: na 1 ml 2,63 n. dušikove kisline dodamo padec NaNOz raztopino 10 kapljic raztopine-b-nitrozo a naftola. Po mešanju omenjene rešitve je spet dodamo tri kapljice urina in mešali. Pozitiven rezultat je dejal, oranžno-rdeče barve, ki se pojavi v 3-5 minutah. Ta slika lahko samo tirozin in njegove metabolite, ki so jih opazili pri pomanjkanju tirozin transaminaze in tirozinemije.
Vzorec na acetona v urinu. To izvedemo z uporabo tablete vsebujejo natrijev nitroprusid. Aceton in acetocetni kisline v alkalnem mediju reagira z nitrozo natrijevega nitroprusida. Na ta način, kompleksne anioni so rdeče-rjave barve. Po barvni lestvici določa znesek acetona v urinu. Tablete za hitro analizo urina za acetona se nastavijo v tovarni "reagent". Komplet vsebuje tudi pipete, barvno lestvico, in navodila.
Preizkus z ninhidrinom na giperaminoatsiduriyu. Reagenti: Ninhidrinski raztopino 1 g v 500 ml 95% raztopino etanola, ki je bila shranjena v temno stekleno posodo v hladilniku.
Tehnika: 1 ml reagenta dodamo tri kapljice urina in mešali. Videz modro ali vijolično barvo, po 3-5 minutah kaže koncentracijo v urinu večjih količin aminokislin. Obstajajo predmeti, ki se zgodi, ko je visoko koncentriran urin ali visoko vsebnost amoniaka v njem.
Vzorec urobilinogen v Ehrlich in porfobilinogen. Reagent: 2% raztopina v dimetilaminobenzoaldegida 2N. HC1.
Tehnika: 5 ml urina dodamo 1 ml reagenta. V prisotnosti urobilinogen in porfobilinogen po 10 minut je roza barva.
Vzorec uporablja pri suma podedovane motnje bilirubin presnove.
Vzorec Selivanov v fruktozo. Selivanova reagent: 0,5% resorcinola raztopljenega v 20% raztopini HC1.
Tehnika: 1 ml urina dodamo 0,5 ml reagenta zmešamo in jih v vrelo vodno kopel za 1 minuto, se prikaže prisotnost v urinu fruktoze po vretju s rezorcinol češnjevo rdeča obarvanost. Vendar, če je zmes kuhamo dalj časa, lahko dobimo podoben obarvanje in prisotnost glukoze.
Vzorec za odkrivanje dednih fruktozemii.
Vzorec Sulkovicha na kalcij. Sulkovicha reagent: 2,5 g oksalne kisline, 2,5 g amonijevega sulfata- 5 ml ledocta, 150 ml destilirane vode.
Tehnika: 1 ml urina v epruveto dodamo 1 ml reagenta in mešali Sulkovicha. Po 1-2 minutah, ko je motnosti, je vzorec v primerjavi s filtrirano urina istega otroka. Stopnja motnosti se oceni vizualno na lestvici od 0 do + + ++.
Zelo pozitiven vzorec primera Sulkovicha z idiopatsko hiperkalciemija.
Analiza z ortotolluidinom bakra. Reagenti: 0,1 g 0,5 g ortotolluidina- tiocianat ammoniya- 5 ml acetona.
Pred določitvijo vzorcev so bili navedeni reagenti zmešamo v navedenih zneskov.
Oprema: dve kapljici urina nanese tanek filtrirni papir in nato posušimo na končno mesto uporablja kapljico sveže pripravljene mešanice reagentov.
Vzorec je pozitiven, če v 30 zdi modro barvo, kar kaže na presežek bakra v urinu. Uprizoritev testi pomaga prepoznati pacientom hepatolentikularna degeneracijo.