Citogenetski metode raziskovanja - praktične spretnosti Pediater

Video: Praktične veščine TSMU 2016 6 leto

Video: Študija gibanja dihal

Od citogenetskih metod za klinično prakso so pomembne analize kariotip in določanje spola kromatina.
Kariotip. Kariotip študiral v celični kulturi, goji in vitro. Za stimulacijo levkocitov v prehodno stanje mitotičnega znamke phytohemagglutinin (2 kapljice 8-10 cm 3 periferno kri uvedemo v kulturi). V fazi mitotičnega aktivnosti popraviti kromosome prodajalca kolhicina obdelamo materiala (pri koncentraciji 50 * 10-9 M). Sledeča obdelava materiala hipotonično raztopino povzroči otekanje jedru regije in spodbuja raztros kromosomih v citoplazmi, ki omogoča študijo njihovi strukturi in mikroskopsko. Kariotip je običajno raziskovali v specializiranih citogenetski laboratorij.
Določanje spola kromatin. Seks kromatin - kromatin telo v obliki trikotnika ali polmesec, ki se nahaja v jedrih različnih tipov celic. osnova trikotnika ali polmeseca pogosto nahaja na jedrsko membrano, in na vrhu ali izbokline s pogledom na središče jedra. Pri ženskah v ustni sluznici kromatin epitelne celice najdemo v 20-70% jedra, medtem ko pri moških - od 0 do 5%.
Domneva se, da je spolna kromatin eden od X-kromosoma, ki je v relativno stanju mirovanja (Barr telesu).

Sl. 17. spola kromatin (Barr organ) je označena s puščico.
Spolna kromatin enostavno odkriti v kateri koli od glavnih jedrskih barvanja barve. To je mogoče najti v telesnih tkiv, celic kože, ustne sluznice, lasnih mešičkov, krvi in ​​drugih.
Najpogosteje, genitalni kromatin določi ustno sluznico celice. Da bi to naredili s kovinsko lopatico za strganje notranjo površino licih in dobljeno celični material uporablja na enoten plasti na steklu. Za barvanje brisa z eno kapljico 1,5% raztopine ali 2 atsetoorseina acetat. Zdravilo je pokrit s pokrivnim steklom, filter papir previdno odstrani odvečno črnilo, in po 2-3 minutah pripravku pripravljena za mikroskopskim pregledom.
Za pripravo raztopine barvila traja 1 ali 1,5 g orseina in raztopimo v 45 ml ledocta. Raztopino segrevamo, dokler parni in 55 ml destilirane vode, nato ohladimo in filtriramo.

V odsotnosti orseina SEM Zakharov predlaga uporaba barvil tiozinovoy skupin: metilen modro, modro obarvanje 1. 20-50 mg enega od omenjenih barvil raztopimo v 10 ml destilirane vode. Barvanje se izvaja 2-3 kapljic raztopine.
Štetje spolno kromatin ustvarjanje mikroskopsko majhnih oznak ali MBI-3 IBI-6 s potapljanjem leč. Štetje vsaj 100 jeder, ki imajo gladko konture in gladka lupina nalega spolnim kromatin v jedrskem ovojnico (sl. 17).
Študija spolnega kromatina (kromosom X) pomaga pri diagnozi kromosomskih nenormalnosti spolnih kromosomov kot sindromi Shereshevscky -Ternera
(45 ° C), Klinefelterjev (47 XXY), trisomija X (47 XXX). Pokazala v študiji števila spolnega kromatina v celičnem jedru daje podatek o številu X kromosomov, ki je vedno ena od ugotovljenih kromatina organov.

Video: spretnosti