Priprava oluščena izdelki - osnova za histologijo

Video: mikrobiologija. Priprava začasnih pripravki (E. Zvonaryova)

Video: Bioefekts: Mikrobiološka priprave s / s

V teh primerih, ko je treba preučiti mikroskopsko strukturo predmeta, ki ima Filmy strukturo (serozne in možganske ovojnice, vezna membrane in t. D.), pripravljen sestavni (skupno) pripravki. Za to film je treba testirati izrežemo del in prepreči gubanje pred fiksacijo kurac v razširjenem stanju na vosek (ali plute) bazo (glej. P. 153).
Po je dokončanje vezave materiala obdelamo na običajen način: zadržanje izperemo, pobarvano, dehidrirani, in vgrajeni v osvetli ustrezen medij.

In vivo (vitalnih) barvanje tkanin

Opisano v prejšnjih poglavjih, ki predelujejo Metode materiala za mikroskopski pregled organov in tkiv imajo veliko pomanjkljivost: raziskovalec je vedno statična stanje objekta, posnete v času ali po prenehanju življenjske procese. Seveda biologi željo, da bi se oboroženi s tehnikami, ki vam omogočajo, da spremljajo v živo organov in tkiv. Ta možnost se odpre z uvod v praksi metod ključnega obarvanja testni objekt.
Osnovne zahteve za supravital barvila: minimalno toksičnostjo in selektivno barvanje posameznih strukturnih elementov celic in tkiv.
Poznavanje posebno razporeditev tkiva različnih barvil v normalno delovanje telesa, lahko določite drugačna deformacija se pojavi pri
teh ali drugih patoloških stanj. Precejšnja pozornost je predvidena vitalne barve v embriološkega študij, študij razvoja, saj je mogoče uspešno izvesti spremljanje gibanja obarvanih celic. Zgoraj v celoti velja za študijo tkivnih kultur (gojenje na hranilnih medijev kosov posebnih organov in tkiv).
Kot običajnih histoloških barvil, vse barve so ključnega barvanjem razdeljen na osnovni, kisla in nevtralna.
Osnovne barve zaznavajo skoraj vse celice, vendar je še posebej dobro celice in strukture, bogata z lipidi. Prav ta zadnja lastnost omogoča dober potrebnega barvanja z osnovnimi barvami živčnega tkiva.
Kisla barvila barvila le nekatere vrste celic in predvsem celicah retikuloendotelijskega sistema, ki ima visoko fagocitna aktivnost. Te celice imajo pomembno vlogo v zaščitno reakcijo organizma. Njihova sposobnost, da se kopičijo delce barvila in vivo kislinsko veliko uporablja bistvenega obarvanje preučiti njihovo funkcionalno stanje. Taka barvila vključujejo tripanskega modra, črnilo, litijev karmin.
Obstajajo različne metode uporabe vitalnih barvil. Blizu laboratorijskih živalih barvanje rešitve dajemo z intravensko, intraperitonealno ali subkutano injekcijo, pri čemer je hitrost obarvanost je odvisna od načina dajanja (maksimalno - na intravensko, najboljše - subkutano). Srce kretnice barvilo dajemo v spinalni limfnega vrečo ali trebušno veno. Barvna male vodne živali proizvajajo okrasje vode v akvariju.
Uporablja kot metoda uvedbe barvilo skozi usta, mešanje v njegovo hrano.
Ponavadi so barvila raztopimo v destilirani vodi ali izotonično raztopino natrijevega klorida. Vendar pa je najbolj idealno topilo kri v serumu ustreznega živali, omogoča boljšo absorpcijo barvila. Za pridobitev taka raztopino pripravimo v sterilnih pogojih 1% raztopino ustreznega seruma barvila, je centrifugirali (3,000-3,500 vrtljajev / min) in supernatant smo odsesali s pipeto.
Obvladovanje potrebnega barvanja tehnike je najbolj primeren v postopku barvanja bele veznega tkiva podgane (ali miši) tripanskega modro.
Priprava raztopine. Raztopimo 1 g tripanskega modrega v 100 ml izotonične raztopine natrijevega (destilirana voda) klorid. Primernost rešitve, če ga hranimo na hladnem za 3-4 tedne. Pred uporabo raztopino barvilo filtrirali, sterilizirali (s segrevanjem do vretja 10-15 min) in pustimo, da se ohladi na 25-35 ° C. Hkrati dvuhgrammovy sterilizirana brizgo in iglo.
Podkožna injekcija. Pomočnik ujame klešče eksperimentalni podganjo kožo na hrbtu in po drugi strani meni, žival na konici repa in sega na vrhu tabele. Preizkuševalec klicanje rešitev brizga barvilom (hitrost 0,5 ml na 20 g telesne mase) prosto roko potegne kožo na hrbtu (ali na stranski ploskvi telesa živali) in ga drži iglo v kožo, vstopi v barvilo. 
Uvod intraperitonealno. Asistent je na podgani kot v prejšnjem poskusu, vendar pa potegne vertikalno glavo. V tem primeru gre za premikanje telo trebušne votline z membrano, ki omogoča enostavno prodreti v trebušno votlino, ne da bi pri tem poškodovali drobovje. Igla se vstavi v levem spodnjem delu trebušne stene pod ostrim kotom (navzdol). Metoda hitreje in lažje kot vezanje nog v ležečem položaju. Koncentracija in količina barvila je enak in kadar jih dajemo subkutano.
Intravensko dajanje. To se lahko izvede v vratne ali repa veno, v podganji vnaprej vezane posebno strojno trebuhom navzgor. Količina barve je najmanj dvakrat kot v prejšnjih dveh metod, koncentracija je enaka. Ko se uspešno enkratna intravenska injekcija dobro obarvanje v 24 urah, medtem ko je v notranjost trebušne -. Je 48 ur subkutano dajanje večkrat običajno ponovi po 3-4 dneh. Žaljivo splošno madeži enostavno označene z modro v oči in sluznice šarenice oči. Skupaj modrikasta koža pride kasneje.
Živali smo usmrtili enega od sprejetih metod (obglavili, eter ali kloroform), odpiranje in izrabiti proizvajajo treba preučiti organov in tkiv.
Fiksacija. Pritrdilni odlagajo v tkivih tripansko modrega najbolje pride pri uporabi kompleksnih držala -. Buena Shtiva itd Vendar, če ne obstaja, se lahko uporabi in formalina (165.). Treba je opozoriti, da je razpisna peleti obarvana, in barvanje difundira v drugih objektov. Priprave preskušanje se lahko izvede iz rezine, pridobljenih o zasegu Mikrotom. Ponavadi se material zlijemo v parafin, smo pripravili odseki 5-7 mm in obarvamo debelina :. Pri uporabi tripanskega modri (ali trupa) - karmin ali nevtralno rdeče, ob uporabi litijevega karmin - metilen modro, itd Nato dehidriramo, osvetlitev in vgrajeni v balzama.