Odkrivanje in identifikacija kisline mukopolisaharidov - osnova histologije

Odkrivanje in identifikacija kisline mukopolisaharidov (glikozaminoglikani)

Prepričljive podatke o prisotnosti kisline mukopolisaharidov lahko dobimo s popolno uporabo naslednjih metod.
Identifikacija kislih mukopolisaharidov o metodi Gal (Hale) (zamrznjenih delov, objemke - formalinom Karnua- Izlivni tekoči parafin). Rešitev koloidnega železa. V 100 ml vrele destilirane vode vlijemo ob mešanju 12,8 ml 10% raztopine železovega klorida, barva raztopine spremeni iz rjave do temno rdeče. Če ga želite odstraniti iz HC1 proizvajajo dializo je.
Raztopino ocetne kisline - 2M.
Nakisano raztopino geksatsiano-ferate (2) kalijev - cianoferatom in HC1.
Metoda. 1. Oddelki 5-7 mikronov debela deparafiniziranega in privedeni pred vodo.

1. Odtočni enake prostornine dializiramo železovega klorida in dodamo 2 M raztopino ocetne kisline. Put rezine v tej raztopini za 10-15 minut.
2. Temeljito izperite v več delih destilirane vode.
3. Process sveže heksacianoferat raztopine v 10 min.
4. Sperite v destilirani vodi.
5. Dokrasit jedro jedrska barvilom (galun karmin, hematoksilin et al.).
6. Dehidriramo, da razsvetlil, da se sklene v balzamom.

Rezultat. Acid mukopolisaharidi pobarvane modro jedro - v rdeči barvi.
Dokaz kisline mukopolisaharidov alcian modro Stidmenu (ključavnice - Carnoy, Buena, formalin- lije parafin). Metoda temelji na tvorbi kemijske vezi med kislinskih skupin kislinskih mukopolisaharidov (glikozaminoglikani) z Alcian modro. Uporablja se za identifikacijo MUCINS epitelija in vezivno tkivo.
Priprava alcian modro raztopino. 0,1 g barvila raztopimo v 100 ml 3% ocetno kislino in filtriramo.
Metoda. 1. Oddelki 5-7 mikronov debela deparafiniziranega in privedeni pred vodo.

1. Alcian moder madež v svezheotfiltrovannom rešitev za 10-30 sekund.
2. Sperite v destilirani vodi.
3. Ehrlich gemalaunom madež 5-10 minut.
4. Razlikujejo v 1% raztopini alkohola.
5. Sperite pod tekočo vodo 10-20 minut.
6. Dehidriramo, da razsvetlil, da se sklene v balzamom.

Rezultat. Kisla mukopolisaharidi modro-zeleno jedro - temno modra ali temno rdeča.
Metode, ki temeljijo na metachromatic. Metachromasia - gre za obarvanje tkiva kot posledica kemijskih reakcij tkanine - barvanje Barvna obarvane strukture bistveno razlikuje od prvotne barve barvilo.
Praktično metachromasy pod mišljeni pojav opazili pri uporabi tiazin skupino barvil.
Identifikacija metachromasia uporabo toluidinska modra (zamrznjene dele ali formalina fiksen, parafinske odsekov). 1. 5-7 mikronov debele odseki so pripeljali do vode.

1. Put za 4-6 ur v 0,5% vodni raztopini toluidin modro.
2. Sperite v destilirani vodi.
3. Za histokemijskih namene takoj preuči, v vodi.

Rezultat. Metachromatic snov rdeče, roza (y-metachromasia) ali vijolično (p-metachromasia).
Temelji na metachromatic načine pridobivanja trajnih priprave.

Razlikovanje kislih mukopolisaharidov

Acid mukopolisaharidi, praviloma ne dajejo pozitivne Schick reakcijo, vendar pa obarvali z Alcian modro in koloidnega železa dati metachromatic obarvanje.
Kislinski mukopolisaharidi ločimo v unsulfated (kondroitin in hialuronske kisline) sulfatiranega in (kondroitin sulfat A, B, C, keratosulfat, heparin, heparin).
Zdravljenje z hialuronidaza. Vsaka razvoskana in polnem razdelkov vodo (kontrola) inkubiramo pri 37 ° C v raztopini testisov hialuronidaza pripravljene v izotonični raztopini natrijevega klorida (1 mg encima na 1 ml) 3 h, drugi - v čisti izotonično raztopino natrijevega klorida (pri pod enakimi pogoji). Nato so vsi oddelki obarvali z eno od metod za kisline mukopolisaharidov. Pomanjkanje barve v oddelkih kontrolnih in prisotnost drugih dokazov, da je tkivo hialuronska kislina in hondroitin sulfat C in A.
Če namesto testisov hialuronidaza uporablja bakterijski (encim deluje mehkejša), je mogoče razlikovati hialuronsko kislino.
Reakcija metilacije. Deperafinirovannye kontrolni odseki damo v vodo 0,1N raztopino klorovodikove kisline v absolutnem metanolu in inkubirali pri 58 ° C 2-3 uri. Potem, skupaj s preostalimi rezinami obarvanih ali toluidin modro ali Alcian. Pomanjkanje barve v oddelkih za nadzor in prisotnost drugih, kažejo, da so v proučevanih tkivih sulfatirane mukopolisaharidi (metilacija privedla do njihovega desulfation).