Identifikacija (skupno) proteina - osnova histologije

Video: Predstavitev na temo "struktura proteinov"

Video: Video. Express ugotavljanje čistosti mesa

Proteini - naravni polimeri amino kislin, ki sestavljajo večino celičnih struktur in tkiv. To je povezano s plastiko, energija, prevoz in encimskih procesov. Zato histokemične njihova detekcija je bistvenega pomena za podroben opis sprememb v celicah in tkivih (tako običajnih in v patologiji).
Obstoječih metod, najbolj razširjena metoda za odkrivanje vseh proteinov, ki jih Danielli, ki uspešno spremenjenih sovjetski histochemists Shubich MG (1963).

Identifikacija proteinov (skupaj) po postopku Danielli (sprememba Shubina MG)

(Carnoy zapahe Brodsky, 10% nevtralnega s formalinom)
Bistvo metode obstoji v tem, da je histološki preparati najprej podvržemo učinkovanju Tris-diazonijeve rozanilina (osnovna fuksina), ki reagira z mnogimi aminokislinskih ostankov tkiva proteinov. Za povečanje barvanje H kislino obdelamo ki povezuje z reaktivnimi skupinami trisdiazoniya že vezan na proteine. Intenzivnost barve je odvisna od koncentracije proteina v različnih histološke strukturo.
delovne raztopine
Dvunormalny (2N) klorovodikova kislina. V 20 ml koncentrirane klorovodikove kisline (gostota 1,19) dodamo 80 ml destilirane vode.
Raztopino osnovne fuksina. Raztopimo 4 g bazičnega fuksina (znamko "za kisline fuksina") v 100 ml 2 N raztopine klorovodikove kisline (dolgo časa je mogoče shraniti raztopine).
Vodno raztopino natrijevega nitrita.
Raztopimo 4 g natrijevega nitrita (NaO2) v 100 ml destilirane vode (raztopino lahko v hladilniku).
Osnovna raztopina trisdiazoniya. Cev zlijemo 2 ml raztopine osnovnega fuksina in nato po kapljicah s konstantno stresanjem epruveta dodamo 2 ml raztopine natrijevega nitrita. Mešanica za 30-60 postane slamnato rumene barve.
Delo raztopina Tris-diazonijeve. Dodamo 0,5 ml raztopine tris-diazonijevega 100 ml destilirane vode, predhodno zapufrano z dodatkom 20 ml atsetatveronalovogo ali drugega pufra s pH 7,9 (delovna raztopina Tris-diazonijevo obstojna več ur).
Nasičeno raztopino H-kisline. Raztopimo 1 g H-kisline v 50 ml atsetatveronalovogo ali drugega pufra pH 9,2.

Video: Predavanje 1.1 | Osnovni pojmi v kemiji | Upam Tantsura | Lectorium

Postopek barvanja (parafin oddelki)

1. Prinesite dele za vodo.
2. Put v delovno raztopino tris-diazonijevega 10-20 minut (bolj natančen inkubacijski čas izberemo empirično).
3. Sperite v destilirani vodi.
4. Spere v treh sprememb atsetatveronalovogo ali drugega pufra s pH 9,2 do 2 minut vsak.
5. Prenos v nasičeno raztopino H-kisline za 15 minut.
6. v destilirani vodi izpirajte.
7. Nevtralizirajo, da se razsvetli in skleniti v balzamom. Rezultat. Histološke strukture obarvane v rdeče-vijolične barve različno intenzivnostjo.

Video: # 08. Formula za izračun bazalno presnovo in energetsko vnosa. Preprosta alternativa zapletene izračune.