Dodatek 2 - Kriptosporidiozo in HIV

Debele sveže fekalne umazanije posušimo na zraku potisniti skozi raztopino auramine fenol, speremo z vodo in hitro madež (5-10 minut) v raztopini karbolnega fuksina. Po izpiranju z vodo, posušimo na zraku in raziskovali uporabo fluorescenčnem mikroskopu (prednostno z vgrajenim sistemom za potopitev).
Rezultati: Cryptosporidium oociste imajo nekakšno svetlo fluorescentne diska, je jasno vidno na temno rdečem ozadju.

IV. obogatitev metode: flotacija in sedimentacije.

Kot flotacijo z uporabo nasičene raztopine natrijevega klorida ali saharoze, nasičeno raztopino cinkovega sulfata (331 g NSO₄.7H₂O raztopimo v 1 litru vode iz pipe). Flotacije se uporablja tudi za Breza medij (mešanica nasičenih raztopin magnezijevega sulfata in natrijevega tiosulfata in sanitarne vode v razmerju 3: 3: 1) zmes Pavleseka (cinkov klorid - 220 g natrijevega klorida - 210 g, vodo iz pipe-800 ml), itd .

1. Flotacija z centrifugiranjem.

Centrifugiranje pospeši proces flotacijo oocist in tudi omogoča, da opere fekalije, tako minimizira kontaminacija nanosi ali pripravka maščobe. Pri pranju njihovih iztrebkov razredčimo z vodo, ne tekočine flotacijsko in filtriramo v epruveto za centrifugiranje 15 ml. Testni material mora biti centrifugirali 1-2 min 2-3 tisoč. Obr / min 3-4 min pri 1500 vrt / min. Po prvem (izpiranje) centrifugiranje supernatant odstranimo in preostali volumen sedimenta ne sme presegati 1 ml. Tekočino Plovna cev polovico njenega volumna in resuspendiramo kroglico v njem prek pipeto z gumijastim balonom ali stekleno paličico. Nato vlijemo tekočino flotacijski z zgornjim robom cevi in ​​ponovno centrifugirali pri istem režimu so Nastalo oocist koncentrata v tekoči površini filma. Industrijska iz tega filma za zbiranje kovinskih ali steklenih kapilarnih zank, ki se uporabljajo za drsno steklo, da se določi zmes barvil Nikiforov in ustrezne metode, in nato podvržemo mikroskopijo.

Video: Da bi se odkrito o eni stvari: Prvi znaki okužbe z virusom HIV

2. sedimentacijski postopki.

Običajno se uporablja eter sedimentacijo, ki mora biti 0,5-1,0 g iztrebki pomešani z 10-12 ml izotonične raztopine natrijevega klorida. Temeljito mešamo suspenzijo seva preko 2 plasti koprivnega platna v epruveto za centrifugiranje 15 ml. Oborino smo dvakrat speremo z izotonično raztopino s centrifugiranjem, nato previdno ponovno suspendirali v 10 ml 10% raztopine formalina, dodamo 3 ml etra in previdno pre peremeshat- zaprti cevi zamaškom. Dobljeno zmes smo centrifugirali 2 minuti pri 1 tisoč. Obr / min. Ester, površinsko umazanijo in formalina možganov in ostane na dnu cevi, da madeži obori in obarvamo eno od metod, opisanih prej.

Pri modificirani metodi, 0,5 ml eteričnih sedimentacija tekoče blato zmešamo s 3 ml 10% raztopine formalina in mešamo dokler ne dobimo homogene suspenzije. Dodamo 30 ml etil etra in previdno premakne s stresanjem, nato dodamo 15 ml 10% raztopine formalinom, mešamo in filtriramo dobljene zmesi skozi gazo v epruveto za centrifugiranje. Konec pipete s skrbno gumijastim balonom (brez dotika stene cevi) spodaj spodnje plasti etrom in nanosi, sesati spodnjo stolpec tekočine in ga prenesemo v drugo cev. Prvič cev ponovno polnjenje 10% formalinom raztopina in centrifugiramo 10-15 minut. z 3000. vrt / min (trajanje centrifugiranja je sorazmerna viskoznosti raztopine) od oborine pripraviti madežev in jih obarvamo z enim od običajnih metodah.

V. Biološki poskusi na miših

Da bi biološkega je treba nahraniti majhne količine fekalij novorojenih ali 2-5 dni belih miši. V navzočnosti Cryptosporidium oocist v vzorcih blata pri miših po 5-8 dneh bo zaznal oocist. Z odprtjem miši v zgodnejšem obdobju (optimalno 3-7-th dni) in histoloških preparatov črevesja (prednostno pri pripravah ileuma) bodo prepoznani endogeni razvojni stopnji Cryptosporidium, lokaliziranih v ščetka mejni coni.

Pri oblikovanju živali biološkega mogoče dodati blato Homogenat antibiotike (penicilin, streptomicin, gentamicin), ki inhibirajo spremljajo mikrofloro, vendar nima vpliva na invazivnosti Cryptosporidium oocist.

Število Cryptosporidium oocist preštetih uporabo Goryaev kamero, ki se uporablja v hematološke praksi. Po inkubaciji omogoča ekscistacijskega oocist, lahko na enak način in izračunali število sporozoitov.

Za lahko kvantitativne določitve štejejo tudi skupno število oocist v obarvanih krvnih madežev, pripravljenih iz določenih količin blatom (npr 0.2 g).

Video: Plague Inc Evolved - # 2 - Smrt prihaja iz severa

Uredil prof Frolov VM
MD Peresadin NA, profesor SN Fedchenko, pomočnik Baklanov AV

Video: Ne! - video o varnem seksu (2)