Obarvanja tkiva po metodi Van Gieson, Mallory - temelj histologije

Obarvanje vezivnega in mišičnega tkiva z metodo Van Gieson

Ta metoda ima več prednosti v primerjavi s hematoksilin-eozinom madež, kot različne barve različnih komponent tkiva. Ko obarvajo Van metodi Gieson uporabljamo dve rešitvi: a Weigert železa hematoksilinom (pripravo glej spodaj.) In b), namesto kisle zmesi picrofucsin eozinom. Kolagen vezivnega tkiva vlaken po barvanju picrofucsin imajo svetlo rdeče barve ter mišic in elastičnih vlaken - rjavkasto rdeče ali rumeno zelena. Iron hematoksilin Weigert madeži na jedra temno rjave ali rjavo-črne barve. Lahko odtenek jedro in močno rešitev Hematoxylin Boehmer (brez razlikovanja).

delovne raztopine

Hematoxylin Weigert pripravimo tik pred barvanjem z mešanjem enakih prostornin osnovnih raztopin Weigert (prvi in ​​drugi) so shranjene ločeno.
Weigert raztopina Izvor: v 100 ml 96% alkohola raztopimo 1 g gematoksilina- druga raztopina: 4 ml 29% raztopine železovega (3+) klorida * zlit z 1 ml smo dodali močne klorovodikove kisline in 95 ml destilirane vode.

* V odsotnosti železovega klorida (3+) se lahko uporabi 2-3% raztopine železovega galuna.

Ko je mešanje druge raztopine zlili k prvi raztopini ni enako, vendar v nekoliko manjših količinah, nato pa smo drugo raztopino dodamo k zmesi po kapljicah s pipeto za enako količino s prejšnjo raztopino.
S spreminjanjem površinske napetosti raztopine se začne plezati stene posode (steklenice vzorec) a in zbira v kapljice, ki ponovnem tok v tekočino. Ta pojav označuje pravilno količinsko razmerje prve in druge rešitve Weigert v zmes in nato dodajanje druge raztopine, ki se ustavi. Dye, če je primerno kuhana, globoka vijolična barva. Če je rjava, da je presežek drugo rešitev. Jedro tako barvila ne bodo pobarvane v črni in rjavi.
Weigert rešitev se sama lahko shranijo več let, mešanica le-teh, ne več kot 3-4 dni, zato je najbolje, da uporabite svežo raztopino.
Raztopino picrofucsin: na 100 ml nasičene vodne raztopine pikrinska kislina dodamo 4.10 ml 1% vodne raztopine fuksina.
Če nujna potreba za pripravo zelo majhno količino raztopine v viali iz filtriranega penicilina zlijemo v nasičeno raztopino pikrinska kislina (polovica mehurček) in ji po kapljicah dodamo 1% raztopino kisline fuksina. V tem primeru lahko krmilna služi kot kapljica zmesi na filtrirni papir, ki mora imeti barvo sveže krvi.

obarvanost

1. Iz odsekov v destilirano prenos vode Weigert Hematoxylin za 2-5 minut. Barvne jedra mora biti nadzorovana pod mikroskopom.
2. Sperite odseke v destilirani vodi in se prenesejo v vodovodni vodi 10 minut (voda je treba spremeniti).
3. Put poglavja 1-2-3 min (včasih Vi min) picrofucsin.
4. Hitro (5-10s) odsekov smo splaknili z destilirano vodo in jih hitro zadržati v 96% alkoholu (preklop), v razsvetlila Carbol-toluen, toluen, in zaprti v Kanadi balzama. Rezultat: kolagenska vlakna iz svetlo rdeče barve in mišic in elastično - rjavo-rumeno ali rumeno-zeleno. Jedro burokorichnevogo ali rjavo-črno.

Barva funkcije.

Zahteva stalno spremljanje pod mikroskopom. Če jedra pridobitev rjave namesto črne, je potrebno, da imajo daljše odseke v hematoksilinom ali manj picrofucsin saj picrofucsin močno razlikovanje tožbo proti hematoksilinom.
Če vlakna vezivnega tkiva obarvajo intenzivno rdeče, nato sledi daljše izpiranje picrofucsin rezine v vodi, pri čemer je kisla fuksina raztopljen. Če, nasprotno, je vezno tkivo pobarvana svetlo magenta, je treba hitro speremo rezine v vodi ali celo izpiranje v celoti in takoj prenese na alkoholov.
Če je šibko obarvanje pridobljen z pikrinska kislina (žlez celic gladkih mišic), je treba pospešiti ožičenje z alkoholi, saj vrniti pripravka pikrinska kislina. Pri pleskanju pripravo pikrinska kisline je potrebno povečati zadrževalni čas reza v alkoholu.
Pomembna pomanjkljivost te metode je belila, tako da jih ni mogoče shraniti za dlje časa. Lahko se uporablja z Mayer hematoksilinom, Karatsu, Ehrlich, vendar hematoksilin Weigert daje boljšo barvo.

Barvanje vezivnega tkiva Mallory Postopek

Obarvajo parafinske profili in tselloidinovye.
Postopek tudi opredeljuje različne elemente vezivnega tkiva, predvsem kolagen in retikulinovye vlaken. To se lahko uporablja za barvanje mišic in drugih tkiv.
Material bolje določen v sublimata zapahi, zlasti v mešalnem Zenker.
Če je material, določen v formalinu, pred obarvanjem odseke je treba dati v tekočino Zenker za 15-30 minut. Nato nekaj minut odseki potopimo v raztopino alkohola joda, sprostimo sekcije iz živega srebra diklorid oborin. Oddelki so bili dani v 0,25% raztopino natrijevega tiosulfata (hyposulfite) pokrivajo jod.

delovne raztopine

Treba je imeti tri delovne raztopine.
Vodno kislino fuksina 0,1% raztopine.
Raztopino fosfomolibdične kisline 1%.
Zmes sestoji iz anilina modro oranžno G in oksalno kislino. Za pripravo mešanice barvila 0,5 g anilina modra oranžna G 2 g in 2 g oksalne kisline raztopimo v 100 ml destilirane vode. To zmes segrevamo do vrenja, ohladimo in filtriramo. Ko se raztopi komponente, zmes postane intenzivno rjave barve z zelenkastim odtenkom. Raztopina primerna za takojšnjo uporabo po pripravi. Po daljšem skladiščenju pred raztopine za uporabo je treba kuhana in filtrirali.

obarvanost

1. Po izpustitvi iz parafinski odsekov destilirane vode prenesemo v raztopini 0,1% kisline fuksina 2-3 min.
2. Hitro izperemo z destilirano vodo, za 1-2 min.
3. Za pritrditev so kislinske fuksina barvanje odseki v 3-5 minutah prenesemo v 1% raztopini fosfomolibdične kisline.
4. Hitro nato spere z destilirano vodo.
5. Transfer odseki v svezheprofiltrovannuyu zmes anilina modro oranžno G in oksalne kisline 1 minuto (da se prepreči obarvanje).
6. Sekcije smo sprali v destilirani vodi.
7. Razlikujejo v 96% alkohol za 3-5 minut ali več, dokler mikroskopom videti pobarvana modro kolagenska vlakna.
8. Se skozi absolutni alkohol, ksilen, zaprti v Kanadi balzamom.

Rezultat.

Kolagenska vlakna in retikulinovye temno modro sluzi - modre, rdeče krvne celice - rdeče-oranžne, mišičnih vlaken - svetlo oranžno kromatina - rdeča z rumenkastim odtenkom, nevroglija in celice ganglijev - rdečkasto-vijolično, sekrecijska zrnca - rdeče.