Barvanje - mikrobiologija s tehniko mikrobioloških testov

Za obarvanje bakterije imeti več rešitev za barvanje, prednostno v posebnih stekleničkah z pipet, ki jih nosijo gumijaste pločevinke. Paint s pipeto se vlije na zdravila, tako da je bila celotna bris pokrita z njo. Priprava barve se postavi na stojalo diapozitive. Tak stojalo postavi na skodelico ali fotografsko pladenj (sl. 14). Če obarvanje je potrebno ogrevanje, potem uporabo posebnih pinceto drsi (sl. 15). Po prenehanju barvilom barvanja pranje vodnim curkom ali drog v posodi speremo z vodo. Ko je pralni pripravki ostane v pokončnem položaju pri sušenju ali posušimo med listi filtrirnega papirja. Če se zdravilo bo ostala voda združena s potopno oljem, bo dal emulzijo, ki preprečuje dober vid pod mikroskopom.
barve
Barve, ki se uporabljajo za bakteriološke študij, spadajo v skupino ti anilin. Ampak, saj so na voljo ne le iz anilina, ampak tudi zaradi drugih derivatov katranu -. Benzen, toluen, itd, je bolj pravilno, da jih pokličete barve iz premoga. te barve so razdeljene na osnovno in kisla. Izraza "kisle" in "osnovni" črnilo ugotoviti le afinitete določenem delu celice. Osnovne barve madež tudi jedro in mikrobov. Acid barvilo madežev mikrobi šibkejša obarvanja tkiva so Obarvani citoplazmi celic. Najpogosteje uporabljena naslednje barve: metilen modro, tionin (modra barva), osnovni fuksina, eozin in safranina (rdeče barve), bismarkbraun ali vezuvin (rjave barve), metilgryun (zelena barva), metilviolet, encijan vijolično (škrlatno barvo). Od tega jih je le eozin - kislina barve. To se uporablja za nekatere posebne namene.
Vse te barve se prodajajo v obliki amorfne ali kristalinične praškov, in so že pripravljene rešitve barv.
Priprava raztopin barvanje. Izhodni material za Skoraj vsi potrebni delovni barve nasičene alkoholne raztopine, ki jih je treba hraniti v zalogi in shranjenih v posodah iz brušenega zamaški. Nasičene alkoholne raztopine smo pripravili takole: 10 g suhega barve se vlije v stekleničko z zamaškom, zlijemo v 100 ml 96 ° alkohola (popravljena) in pustimo stati nekaj dni, vsak dan tresenje raztopino. Od teh nasičene raztopine pripravimo alkohol-voda pastvory primeren za barvanje mikrobov. Najbolj pogosto se uporabljajo naslednje rešitve.
CARBOLINE magenta (škrlatna Tsilya)
10 ml nasičene alkoholni raztopini fuksina 100 ml 5% karbonskega kisline
enotni magenta
10 ml karbonskega fuksina 90 ml destilirane vode
Alkalni metilen modro, 30 ml nasičenega alkoholna raztopina modre 100 ml destilirane vode, 1 ml 1% raztopino alkalijskega
CARBOLINE encijan vijolična 10 ml nasičene alkoholni raztopini gentsiaivioleta 90 ml 5% karbolnega kisline
gentsiaivioleta raztopine dobimo delce, za barvanje. Namesto tega lahko uporabite gentsiaivioleta nasičene alkohola rešitev ali metilvioleta kristalvioleta. Rešitve karbonskega kisline lahko traja od 1% namesto 5%. Poleg tega za barvanje po Gramu lahko uporabimo 0,25% vodne metilvioleta kristalvioleta ali brez karbolnega kisline. Raztopino opornikov in ne obori.
Po analogiji z modro encijan raztopine vijoličasto uporabimo namesto kosov filtrskega papirja, predhodno namakali v alkoholni raztopini in nato barva posušimo. V ta namen se listi filtrirnega papirja potopljen 1-2 minut v 1-2% raztopini barvila pri 96 ° alkoholu, nakar smo papir posušimo na iztegnjeno vrvi ali stekla palice in narežemo na koščke 2x4 cm. Ti dokumenti so shranjeni v zaprti kozarci za nedoločen čas .
Preproste metode za barvanje mikrobov. V laboratorijskem tehniko enostavne in kompleksne metode barvanje mikrobov. Preprosta metoda slikanja imenujemo barvni pripravek po kateremkoli eno barvo. Takšne metode vključujejo fuksina obarvanost razredčene alkalne ali metilensko modro.
Barvanje razredčen vijolično. V brisa drsnik pripravo in pritrjevanje plamenu plinskega gorilnika. Nato ohladimo formulacija za 1-2 minut zlijemo razredčeno fuksina. Barva je speremo z vodo in posušimo formulacije.
Prevleka alkalne metilen modro (Loeffler). Na slide bris je pripravljena in jo pritrdi na ogenj. V ohlajeno brisa zlijemo metilen modro 2-3 minute. Barva je speremo z vodo in posušimo formulacije. Ko obarvamo diferencirana jedrom in citoplazmo, zato obarvanje patološkega materiala (gnoj, izločkom, in tako naprej. D.) ustrezne za uporabo metilensko modro.
Razvitimi metodami barvanje mikrobov. V metodah barvnih kompleksnih mikrobov na eno in isto zdravilo vpliva več barvil rešitve. Zapletene metode temeljijo na fizikalno-kemijsko strukturo in afinitete bakterijskih celic z nekaterimi mikrobnih barve. Te obarvajo tehnike so pomembni pri diferenciaciji mikrobov. Za zapletene metode vključujejo Gram madež, Ziehl - Nielsen, Neisseria, itd ...
Barvanje mikrobov gram barvanjem. Vse mikrobi v svojem odnosu do barve metode Gram so razdeljeni v dve skupini: a) po Gramu pozitivni ali grampolozhitelnye- b) po Gramu negativne ali gram-negativna.
Različne povezane z Gram obarvanost je odvisna od razlike v fizikalne in kemične strukture bakterij samih. Za barvanje po Gramu klasični metodi zahteva naslednje raztopine:

1. Karbolin encijan vijolična;
2. Raztopina Lugolova (jod kristalno 1 g kalijevega jodida 2 g in destilirano vodo 300 ml-jod in kalijev jodid zmešamo in raztopimo v 5 ml vode, nato pa dodamo preostalo vodo);
3. alkohol 96 °;
4. razredčili magenta.

slikarske tehnike Gram. Na določen bris dal filtrirni papir, velikost še vedno bris. V tem dokumentu encijan raztopine vijoličasto zlijemo na I-2 minutah. Zlit črnilo na papir in brez izpiranja z vodo PRIPRAVA, zlijemo 1- 2 minuti Lugolova raztopina raztopina pred Pocrnjenje bris. Potem smo Lugolova raztopina raztopina odteče in 1 / 3-1 minut zlijemo alkohol 96 ° (droga mora Drmusati). Sprali z vodo in nato razredčiti magenta barvo (1-2 minut). Kondenziran barva, izperemo z vodo, posušimo in mikroskopiruyut.
Spremenjen Postopek po Gramu (z A. modrina). l.Ha fiksno razmaz prekriva trak filtrskega papirja, impregnirane z 1% raztopino alkohola kristalvioleta ali encijan vijolično.

1. Nanesemo na papirju 2-3 kapljice vode in pustimo stati 2 minuti.
2. Papir odstranimo s pinceto in zlijemo Lugolova raztopina raztopina za 1-2 minut.
3. Razbarva z alkoholom (10-30 sekund).
4. Poleg fuksina obarvali z razredčenimi (1-2 minut). _

Mehanizem barvanje po Gramu. POVZETEK Gram Postopek obstoji v tem, da ima barva gentsian- metil ali kristalviolet sposobnost, da se trdno pritrdi v bakterijsko celico. V tem primeru pod vplivom alkohola razbarvanja ne pride, je mikrob obarvano vijolično. To pomeni, da je gram pozitivna. Če v celični barve bakterijske ne bo fiksna, nato pod vplivom alkohola mikrobov razbarva in zaznavajo dodatne barve - razredčimo vijolično. Mikrobi so pobarvane v roza, t. E. So gramnegativne (sl. 16 vložek).
Barvanje odpornih mikrobov kisline. Metode za barvanje kislinske bakterije, ki se nanašajo na njihovo sposobnost, da se pobarvan veliko rešitev barve barv pri segrevanju. V nadaljnjih ukrepih šibkih kislin, se ne razbarva. Z je take klice s kislino obdelamo mogoče razlikovati od drugih bakterij. Najpogostejša barva Ziehl - Neelsen.
slikarske tehnike. 1. Na fiksnem brisa objavljen kos filtrirni papir, na katerega CARBOLINE škrlatna in priprava obarvali s segrevanjem do trikratno videz paro, nakar se barva ostal za nekaj minut in pustimo, da se ohladi priprave.

Sl. 16. barvanja po Gramu aureus in Vibrio.

1. Zliti barvanje in izperemo s pripravo vode. 3- razbarva s 5% vodno raztopino žveplove kisline (10-30 sekund).
2. Sprali z vodo.
3. Speremo s čistim alkoholom 10-15 sekund.

6. alkohol pralne vode.
7. Dokrashivayut Leffler modra za 3-5 minut.

Sprememba barve pripravka lahko proizvajajo tudi 3% raztopino klorovodikove kisline alkohola. S to metodo, kislinsko-barvanje tubercle bacili obarvajo rubinasto rdeče barve in druge kisline, hitro bakterije - modra (glej sliko 88 v vložka ..).
Kislina in alkoholno odporna tubercle bacili ker jih sestavljajo mycolic kisline, reagira kemično z karbolnega fuksina. Ta spojina ujame barvo v mikrobno celico, in zato ne razbarvajo palice.
Barvanje spora. Mikrobiološki navada več barvanje tehnike spore (sl. 17 vstaviti).

1. Postopek Peshkova. Na robu drsnika izdelavo tanek razmaz iz bakterijskih kultur, posušimo na zraku in zabeleži alkohol eter spirt- formalinom ali pas plamena gorilnika. Fiksen Formulacija zlijemo Lefflerjem modrega plamena gorilnika in segrevamo do vrenja 15-20 sekund. Ohladimo pripravek, izperemo z vodo in dokrashivayut 0,5% vodno neytralrota 30-60 sekund. Barva je izperemo in posušimo formulacijo. Spore se obarva modro ali modro barvo, vegetativne oblike - v roza.
2. Postopek Hansen. Zdravilo je pritrjen na gorilniku 5-7-krat s fiksnim zdravilo dano kos filtrirni papir, na katero je CARBOLINE škrlatna, in plinskim gorilnikom zavre. Zdravilo se daje nekoliko ohladi, dodal karbonskega fuksina in kuhamo še enkrat. Potem doliv CARBOLINE magenta, kuhamo še tretjič. Priprava pustimo, da se ohladi, izperemo z vodo, razbarva s 5% raztopino žveplove kisline 20-30 sekund in dokrashivayut modra 3-5 minut. Spore trdno slikati fuksina, - rdeča, vegetativne telesni bakterije razbarvajo izpostavljenosti žveplove kisline, obarvali z metilen modrim za modro (glej vstavljene na sliki 101 ..).

Sl. 18. Kapsule iz Pneumococ-cus.


Sl. 17. Spori bacilov.

Sl. 19. Kapsule bakterij.

Prevleka kapsul. Prevleka kapsul upravljati z običajnimi barvila, metilensko modro ali razredčeni magenta in bogatih brisom organov ali tkiva tekočine (sl. 18 vložnega). V teh primerih se telo mikrobov in ozadja (telesnih celic) obarvan modro ali rdeče, kapsula je viden kot brezbarvno platišče obdaja mikroba.
Metoda gins. Pri barvanju kapsule čiste kulture bakterij z gins uporabljajo.
slikarske tehnike. 1. Na stekleno ploščico obložena kapljico, ki vleče črnila in razredčimo z enako količino vode.

1. Nastalo padec je izdelan majhno količino agar ali juhe kulture bakterij in mešane zanke.
2. Edge brušenje stekla zaskrbljenost kapljice črnila in ko je črnilo širi na robu stekla, da bris, razmaz krvi.
3. Smear določen živosrebrov klorid v koncentrirani raztopini 1 minuto ali plamena gorilnika.
4. Sprali z vodo (pri vezave korozivno sublimata).
5. Karbolno fuksina obarvajo modro ali 5-10 minut.
6. Izperemo z vodo, posušimo in mikroskopiruyut.

Kapsule ne madež, vendar z uporabo maskara definirano močno zastopani, bakterijska telo pobarvana in ležijo znotraj kapsule (sl. 19, vstavi).
Premaz metachromatic zrna (volutin) Neisseria. dve barvi treba pripraviti: a) ocetna modra Neisser, b) lak na vezuvin ali bismarkbraun.
Xin Neisseria sestavljen iz dveh raztopin:
raztopino
Metilen modro 0,1 g Etanol 2 ml ocetne kisline, 5 ml destilirane vode 100 ml
raztopina B
Kristalvioleta 1 g
Etanol (absolutno) 10 ml destilirane vode 300 ml
Rešitve A in B smo zmešali neposredno pred barvanjem zmesi 2: 1.
Paint vezuvin ali bismarkbraun, pridobljen z raztapljanjem 1 g praška v 300 ml vrele destilirane vode.
slikarske tehnike. Fiksen formulacija nanese bluing Neisseria 0,5-1 minuto, speremo z vodo in barva nadalje pobarvane z raztopino vezuvina 1-3 minut. Po tem pripravek izperemo z vodo, posušimo in mikroskopiruyut. V tem procesu so bakterije obarvamo v svetlo rjavo barvo, in metachromatic zrn - v modrem (sliki 83 in vložka.).
V nekaterih laboratorijih, saj je klasična metoda Neisseria nekoliko spremenjen. Ocetna modra se uporablja za 4-5 minute, izperemo z vodo. Nato je zdravilo zlijemo raztopina V2-1 minut Lugolova se vlije in dokrashivayut vezuvinom za 1-V2 minut.
Slikarstvo na Romanovsky-Giemsa. Paint Giemsa - Azure mešanico (organsko barvilo pridobljeno iz metilensko modrega) in eozinom metilensko modro. Kot v raztopini modra, ki obarva citoplazmo celic v modri barvi in ​​jedrih celic, zrnatosti, sluz, kapsule bakterije - rdeče-vijolično barvo.
Prevleka Romanowsky-Giemsa je eden od osnovnih tehnik v študiji morfologije protozojske, spirohete, in pri preiskavi krvnih celic.
Način uporabe. Do 10 ml destilirane vode je bil nevtralen ali rahlo alkalna reakcija neposredno pred obarvanost droge dodamo 10 kapljic barve in takoj zlijemo na fiksni drog (ali drog smo potopili v čašo z barvo). Po 1 uri je barva zlijemo je zdravilo izperemo z vodo, posušimo na zraku in testirali. Če postavimo s pripravku barve v inkubatorju pri 37 °, obarvanje strel dodaj hitreje (30-40 minut). Rezultati obarvanje odvisni od lastnosti vode, tako da je treba preveriti njeno reakcijo.
Barvanje za rikecijska Zdrodovsky. Fiksni tanek razmaz plamena gorilnika. Barvanje proizvajajo razredčeno Carbol fuksina (10-15 magenta kapljice na 10 ml destilirani vodi) za 5 minut. Painted pripravek smo sprali z vodo in nato razbarvali v raztopini organske ali mineralne kisline (0,5% citronsko kislino, 0,01% klorovodikove kisline) za 2-3 sekundi. Pripravek smo nato sprali z vodo in dokrashivayut 0,5% raztopino metilensko modrega za 1,3 minute. Pri pripravi na modri podlagi, ki bo viden pordela rikecija (sl. 116 vložek).

Študija mikroorganizmov v živem stanju

Ker so metode odkrivanja težko migetalke, in določitev mobilnosti bakterij služi za določitev svoje vrste, v vsakdanjem laboratorijske prakse za določanje mobilnosti opazovanja uporabe bakterij v živem stanju - v zdrobljeni ali visi padec.
Zdrobljena slama. V sredini drsnika prevlečeni obliki zanke ali padec pipeta testnega materiala. Ta padec je pokrit s pokrivnim steklom, nežno prekrijejo z pinceto, tako da tekočina ne tvori zračne mehurčke. Pravilno je padec zapolnjuje prostor med pokrovom in tobogan, vendar tekočina ne sega čez rob pokrova stekla. Če je potrebno zdravilo, ki se šteje za dolgo časa, robovi pokrivalko predhodno namazati z vazelinom.
Viseči padec. Kapljica testnega materiala, nameščen na sredini krovnim stekelcem. Nato je pokrov steklo hitro zavrti spusti dol in dal na steklu z izrezom ( "luknjo") v sredini. Spusti treba prosto visi v izrezu brez dotika njenega dna in robov (sl. 20). Robovi odprtinama na drsniku, ki se predhodno namazati z vazelinom. Tako je padec hermetično zaprt v vlažni komori in zaščiteno pred izsušitvijo.
Definicija mobilnosti v mikrobov, ki se uporabljajo v laboratorijsko diagnostiko griže, kolera, tifus in drugih bolezni.
V študiji živih mikrobov, ki se odlikuje aktivno vidni premikajoĖi bakterije, kar kaže na prisotnost njihove nevidne bičkov, je s pasivnimi molekularnih (Brownovog) premike skupne vsem suspendiramo v tekočih drobnih delcev (krvnih celic, žita, prašne delce, mikrobe da so brez bičkov in uničeni) .

Sl. 20. Viseči padec.

Raziskave v temnem vidnem polju. Gibanje bakterij in spirohete je mogoče opaziti v mikroskop, ki se razlikuje od običajne uporabe Bright Side razsvetljavo, pri čemer je grafična podoba svetlobnega objekta na temnem ozadju. Načelo temnem polju in temelji na dejstvu, da so svetlobni žarki odkloni vstran spadajo gosto delce (kot so bakterije) in zadnji skozi oko opazovalca predstavljajo svetlo. Stranska osvetlitev v mikroskopom je mogoče pridobiti z zamenjavo konvencionalnih Osvetljevalec posebno kondenzator s senčenjem v centru. Takšen kondenzator ima vse centralne svetlobne žarke in oddaja le obrobno. Naš pristop je, kot sledi. Nanos na steklu in kapljico testnega materiala je prekrita s stekelcem nežno izogniti zračne mehurčke. Nato smo površina kondenzatorja objavljen kapljice vode ali borovo olje, in voziček s pripravo postavljeni na kapljico.

Video: citologija-2: barvila