Obarvanje in zaključek sekcije - osnova za histologijo

Video: Povzetek histoloških vzorcev pod pokrovom zdrsa.

Rezina pripravljena na enega od zgornjih metod, je bilo mogoče preiskati v mikroskopom, je nujno, da so strukturni elementi sestavnih tkiv dobro vidna v prepuščeni svetlobi, in da je rez zaščiten pred morebitno kontaminacijo in poškodbami. Zato je še dodatno zmanjša njihova obdelava vključuje barvanje, beljenje in zaključek.

Splošne opombe

Kljub temu, da ima dele slikarstva dolgo zgodovino, do tedaj povsem prikriti bistvo akcijskih mehanizmov mnogih barv. Nedvomno le, da so podlaga za obarvanje mikrostruktur tkiva fizikalno-kemijski procesi. Iz Najprej je treba ugotoviti fizikalni faktorji pojava difuzije (penetracije) adsorpcijo (absorpcija površinsko) in odstranitvi (globinska impregnacija) barvila in topnosti kemikalije - elektrolitskih raztopinah in barvanje lastnosti tkanin samih. Prav tako pomembno je gostota tkiv in razpršenost barve. Prva lastnost določa zaporedje barvanje posameznih struktur, drugi - hitrost postopka barvanja.
Temelji na lastnosti elektrolizi ločevanja v praksi histoloških barvil v tri skupine: osnovni, kisla in nevtralna.
Osnovno barvilo je eno barvilo ali njegove soli in barvila celične in tkivne strukture kisle narave, kot kromatin jedro, ki vsebuje DNA, in endosoma vsebuje RNA. Tako izraz bazofilija (ljubeč baza) določiti komponente tkiv, barvanjem z osnovnimi barvami (tionin, hematoksilinom, metil zeleno, itd).
Kislina barvilo - barvilo kislina ali njene soli, pri čemer je barvilo materiala in delce osnovne narave, na primer granule eozinofilcev, citoplazmi določenih celic sprednjega režnja hipofize ipd zato izraz oksifiliya (kisloljubnim - ljubeč kisline). Tkiva elementi barvanje kisline barvila. V to skupino snovi vključujejo eozinom, eritrosinom, kislo fuchsine, kongo rdečega in drugi.
Nevtralno barvilo Spojina tvorjen z vodnih raztopin kislih in bazičnih barvil (barvanje spojine z bazo barvila kisline). Ta skupina vključuje Sudan, eozinovokisly metilen modro in drugi.
Ni treba zamenjati z zmesjo nevtralen barvila nevtralno barvila, označena s sočasno prisotnost v raztopini osnovnih in kislih barvil. Izraz nevtrofilija Enako velja za rezultate barvanjem z obema barve skupinah, saj odraža v lasti barvila ne, in ravnovesje med kislimi in osnovnih lastnosti prevlečenih elementov.
Treba je opozoriti, da imajo kakovost barve in njeno odpornost lahko pomembno vplival na način vezanja, pred in pripravki, ki po zdravljenju. Zato moramo dosledno spoštovati vse smernice in splošna pravila barvanjem.
Poudariti je treba tudi, da je večina nespecifičnih histoloških barvil, Ali t. E. ne razkrije kemične narave sestavin tkiva. Prav tako se lahko uporablja le za preučevanje morfoloških značilnosti mikrostrukture.
Barve, ki se uporabljajo za histološke namene, razdeljen na naravna in umetna.
Obstaja več vrst histološko barvanjem: progresivno, regresivno, neposredno, posredno, preprosta in zapletena.
Progresivni obarvanje - je metoda, pri kateri so rezine v barvo, dokler, dokler ne doseže zahtevane ravni obarvanje.
Regresijska - prebarval prvih odsekov, nato naravnamo na želeno barvo s spiranjem z ustrezno tekočino, ki omogoča bolj jasno loči posamezne elemente tkiva.
Moramo vedno imeti v mislih: a) Launderjevim tekočina skrbno odstranjevanje (v nasprotnem primeru pa bo še naprej delovala in bo izkrivljala rezultat barve) - b) prednostne uporabe tanko srezov- c), ki so ločeni barvila daje boljše rezultate kot močnih rešitev (debela v prerezu, in visoka koncentracija diferenciacije barvila težko in vodi do neenakomerne barve odsekih) - d), da se barva izvajajo pod nadzorom mikroskopom.
Uporaba nazadoval tehnikami barvanja zahteva določeno znanje, ki je pridobljeno postopoma.
Neposredno obarvanje - obarvanje predmet neposredno v raztopino barvila, posredno (jedkanjem) - rezine obarvamo želeno barvilo šele po posebno predobdelavo jedkalna barvila.
V preprosti obarvanje eno barvilo Poskus št. Kompleksna obarvanje formulacija obsega obdelavo več barvil (dva ali več) istočasno ali zaporedno (glej. Hematoksilin-eozinom obarvano metodo Van Gieson).
Vse metode histološko madeži lahko razdelimo v dve glavni skupini: a) Raziskava se uporablja za pridobitev celotne ocenjene predstavitev objekta v raziskavi (poslikane večinoma jedro in citoplazmo celic) - b) posebna, ki omogočajo, da se barve ravno tkiva in celične elemente, ki obrestne raziskovalce (celična organelle, vlaknaste strukture, in tako naprej. d.). Metode, ki sestavljajo drugo skupino, so bolj zapletena in zahteva posebne metode posnetka.
Da bi dobili dobre rezultate s katero koli metodo za obarvanje histoloških preparatov, je potrebno upoštevati nekatera pravila.

1. Barvanje raztopine morajo biti čiste, tako da je treba vse barvilo filtriramo pred uporabo in vodno raztopino pripravimo s samo destilirano vodo.

Sl. 77.
Lokacija bioloških očal (baterije) za odsekov obdelavo prilepljena na steklo (odstranitev voska, dehidracija).

1. Raje: a) obarvanje nizko koncentracijo za dolgo časa pred prehodna barvilo visoko kontsentratsii- b) uporabo regresijskih tehnik.
2. Previdno izvajati vse postopke v okviru priprav za barvanje z rezanjem in post-obdelave.

tehniko barvanja

Advance priprave. Preden nadaljujete z obarvanjem odsekov, so običajno podvrženi posebni predobdelavi, katerih narava je odvisna od materiala in določitvi metode odseke.
Parafinski odseki zahtevajo najbolj izpopolnjenih usposabljanje. Ker vosek nima zadostne preglednosti in zavira proces obarvanost (histološke barvila - je vodne ali alkoholne raztopine, slabo prodirajo tkivo v parafin), je treba odstraniti iz reza. Pri tem zmanjšanjem podvržemo razvoskanjem - postopek obratne, ki se izvaja med pripravo objekta za polnitev v parafin, v prerezu oziroma zaporedno speljani skozi parafinski koncentracij topila navzdolnja alkoholi in damo v vodo ... V praksi se to izvaja tako.
Lahko nadomestiti 96% alkohola nadomestiti del absolutnega etanola, in namesto tega uporabili 70% 80% ali 60% alkohola. Pomembno je, da se ohrani le koncept.

Označevanje biološke skodelice (ali visoke tehtičih), se vlije v ustreznih raztopin in so v zaporedju (sl. 77), ki omogoča izvedbo manipulacije na naslednji shemi.
Opomba. V primerih, ko je bilo gradivo določen v tekočinah, ki vsebujejo živo srebro diklorid odseke je treba uporabiti v nadaljnjih postopkih, potem ko se jih razvrsti v 96 ° alkohola jodiranih alkohola. Zadrževalni čas v poziciji raztopine empirično prilagoditi z opazovanjem pod mikroskopom za raztapljanje živo srebro diklorid oborine. Ker jod negativno vpliva na več barvil odstranimo z odseki naknadno obdelavo (po 70% alkohola) raztopina giposulfata 0,25% do izginotja rumenkaste barve. Nato dobimo giposulfata pranju v destilirani vodi.
Tselloidinovye oddelki lahko naslikal, ne da bi odstranili Keloidin. V teh primerih rezine z 70% alkoholom (ki je, v katerem so shranjeni ali v katerih zbrani v procesu rezanja) smo prenesli v 50% alkohola in nato z destilirano vodo. Če se uporablja barvilo madež Keloidin, se slednji odstranimo z dajanjem rezino v enem od Keloidin topila (mešanice enakih količin absolutnem etanolu in etru, acetonu, metil alkohol). Po prenehanju delovanja Keloidin rezina obdelan na enak način kot v razvoskanjem (padajoče koncentracije alkoholov - voda).
Želatinske odseki osvobojeni želatine, dajanje v nekoliko fermentiranih destilirane vode segrejemo na 37 ° C. Če je enota izpostavljena nadaljnji zbitost v formalinu, nato odstranite želatina ni mogoča, in da je v nekaterih primerih lahko ovira mikroskopijo.
Zamrznjene sekcije ne zahtevajo predhodne obdelave, saj ponavadi se zbirajo pri rezanju v destilirano vodo.
Predobdelava in post-slika je lahko izpostavljen tako prilepili na diapozitive in prosto plavajoče odsekov. V prvem primeru se uporabljajo biološke skodelice, posebno celico, visoke tehtičih. Za večjo zmogljivost, očala rezine zložene v parih strani, ne nosilnega roba (nazaj) med seboj in razporejena v trikotniku (sl. 78), ali (v večjo posodo) nameščenimi pari drug za drugim, ločeni s z različnimi orodji (ukrivljeno steklo ali kovinsko ploščo, in tako naprej. d.). Za delo s prostimi rezine, ki se uporabljajo za ure očala, nizko tehtičih ali skodelice. Ni prilepili rezine jedilnega se prenese iz ene v drugo s steklom (ali kovinske) trnka ali lopatico in steklo - s pinceto.

Sl. 78..
Lokacija steklo z rezinami v skodelico.
Posoda mora biti jasno označeni in razporejena v določenem vrstnem redu, ki zagotavlja želeno zaporedje delovanja.
Opomba. Pri prenosu odseke iz ene raztopine v drugo mora biti zagotovljeno, da se naknadna odsek tekočine čim manj onesnažene prejšnji (še posebej, če se gibljejo od ksilen alkohola). Če želite to narediti, prenos diapozitive in brezplačnih plavajočih oddelki poskušali zagotoviti maksimalno tekoče odtok, zagotoviti istočasno, da se zagotovi, da se rez ni usahnil (sušenje opazno pobelil rez). Diapozitivi so zložene v parih, morate povezavo prekiniti in se hitro posuši na zadnji strani filtrirnega papirja ali krpo, pri čemer pazimo, da ne pomešajo stran. Prav tako bi morali biti previdni pri spuščanju in odstranjevanje rezine iz stekla, ker bi v tem primeru lahko opraskan dele.
Bi bilo treba spremeniti pravočasne rešitve, ki jih preprečuje prekomerno onesnaževanje.
Če rezine v teku nadaljnje predelave zapustiti odlepi od stekla (z uporabo ločenih kislih ali alkalnih raztopine ali premalo trajno povezovanje), potem se lahko popravi z tselloidinovuyu zaščito. Pri tem odseku skozi vodo, zaporedno v 70% in 96% alkohola, nato se steklo namočeno v raztopini 0,5-1% Keloidin, odstranimo, da se nekoliko posuši (ne za dokončanje sušenje!) In damo v 70% alkoholu.

Sl. 79.
Naprava za sočasno obdelavo velikega števila očal s rezine.

Rezultat teh manipulacijah rezati in sosednji odseki drsnika tselloidinovoy prekrita s tanko folijo, in s katerim se doseže s krepitvijo rezino in na steklo. Zatem smo sekcije nato spere z destilirano vodo in obarvamo.
Nosilni obarvanje. Ko so obarvane sekcije prenese na vodne barvila destilirane vode in barvanje z alkoholom - od alkohola direktno primerna raztopina koncentracijo obarvanje (direktno barvanje) ali v prvi tekoči jedkalu (posredno madeži). Če zdravilo pridobi želeno barvo intenzivnost se izperemo z vodo (ali alkohol), da odstranimo prebitek barvilo in nato, če je potrebno, razlikovati v primerni tekočini. Presežek barvilo izprane, dokler se ne preneha premakniti iz reza v pralno tekočino.
Obarvanje odsekov prilepljena na steklo, lahko izvedemo tako, da jih položimo v raztopino barvila in barvilo nakalyvaniya strižno. V prvem primeru uporabimo steklene lončke, kivete ali posebne kovinske nosilce, ki omogoča istočasno slikati veliko število (40-50) stekla (sl. 79). Za obarvanje kurca v ravnih plošč ali plošč se postavi vzporedno steklene palice, ki jih na steklene ploščice. Da se držijo ne premakne, njihovi konci povezani z gumijasto cev. Zatem strižna pomočjo pipete raztopine nakapyvayut
barvanje. Če madež je dolga, da bi se izognili izhlapevanje lokaciji za barvanje rezine pokrita z majhno urnim steklom ali skodelico. Podoben učinek lahko dosežemo z dajanjem stekelca z barvilom po kapljicah dodali v petrijevko, istočasno dajanje več volne namočeno v vodi. Ko je skodelica zaprt, vlaženje zgodi, kar vodi do znatnega raztopini zmanjšanje izparevanja barvilo. Barvanje brezplačno prereze kot v predhodni pripravi, so v Buxy ali watch očala.

Videoposnetek: H & E madež

Video: PAO FNKTS: kompleks barve in sklepi Prisma-Film