Razsvetljenstvo in zaključek sekcije oblečene v smolo - podlaga za histologijo

Razsvetljenstvo in zaključek oddelki

Barvati zdravilo lahko raziskovali v prepuščeni svetlobi in po možnosti več za shranjevanje, mora biti pregleden in zaščiteni pred izsušitvijo, onesnaževanje in škodo.
Vsi ti pogoji so na voljo razsvetljenje in zaključek priprave v posebnem okolju, ki ohrani svojo jasnost, barvo in strukturno celovitost.
Okolje za sklenitev lahko razdelimo v dve glavni skupini: a) vodno mešajo (glicerin, gum arabščina, želatina) - b) ne meša z vodo (razne smole). Snovi iz prve skupine so hkrati razjasnitev in ne zahtevajo dehidracijo droge, medtem ko pred sklenitvijo zdravila v smolo, mora biti temeljito dehidriran in razsvetlila v karbolksilole (toluen, benzen) ali optičnih olja (bergamotke, cajeput, nageljnove žbice et al.). Kljub temu, da je postopek za sklenitev priprav na suho srednje (smole), je bolj zapleteno in povečuje stroške za zdravila, ki se uporablja najpogosteje, saj ima nekaj pomembnih prednosti pred metodo pripora v vodnem okolju. Glavni med njimi so: visoka stopnja preglednosti v pripravi, dolgoročno ohranitev njegove barve in strukture nespremenjeni, priročno skladišče. Najpogostejši igrišče za sklenitev balzamom (jelke ali kanadske).

Zaključek smole

Dehidracija (komplet) za pripravo je predpogoj njegove sklenitve smolo.
Za pripravo obarvanega vode, ki poteka skozi vrsto naraščajočo koncentracijo alkohola (60, 80, 96 in 100%).
Razsvetljenstvo je zdravilo že v procesu dehidracije, ampak zato, ker alkohol ne raztopi balzam, je treba odstraniti. Za ta pripravek daje v eni izmed topil balzam, ki odstranjevanje alkohol, hkrati povečuje preglednost zdravila. Najpogosteje se uporabljajo v ta namen ksilen, ki se lahko zamenja s toluenom ali benzenom.
Pri obdelavi tselloidinovyh ne sme lepljeni želatinske zamrznjene odseki 100% alkohola in namesto karbol-ksilena, da absolutnega etanola povzroči otekanje prvega in drugega puckering. Ker Carbol-ksilen uniči nekatera barvila v njem ostanejo drog ne sme presegati 3-4 minut, nakar je treba skrbno oprati v dveh delih čisti ksilena.
Za pripravo raztopine Carbol-ksilena, da stopijo v inkubatorju (pri 56 ° C) kristalnega karbolnega kislino in ga nato zmešamo z ksilen v razmerju 1: 4, 1: 6.
Treba je opozoriti, da Carbol-ksilen krši dvolomne snovi v tkivu, tako da se ne more uporabiti za študij polarizacije.
Če je potrebno, da bi se izognili uporabi absolutnega etanola, poleg karbol-ksilena, je mogoče uporabiti optično olje (cajeput, bergamotke, strok). Po odstranitvi odvečnega alkohol nakapyvayut olju, nato pa po 2-3 minutah, osušili reši filtra (gladko) papirja in ga večkrat ponovimo Tak postopek se izvaja s ksilenom (benzen, toluen).
Če je potrebno izključiti pripravki za čiščenje alkoholi majhno trdnjave (elucija določenih barvil -. Barvanje picrofucsin itd), je drsnik postavljen na filtrirni papir upside droge in osušili rezina večkrat gladko zložena * filtrirni papir s previdnim pokriva njegovo pripravo in vodenje prstom vzdolž stekla. Nato se ista filtrirni papir previdno odstranimo in damo v 96% alkohola drog. Nadaljnja obdelava poteka kot običajno.

* Filtrirni papir z grobo površino, za te namene ni primeren kot zdravilo onesnažuje vlakenca.

Če zdravilo ni dovolj sproščena iz vode, potem ko je potopljen v ksilena pojavi belkasta meglica. V tem primeru je zdravilo treba ponovno postavi v absolutnem alkoholu pri končnem odstranjevanju vode.
Pri prenosu rezine iz ene tekočine v drugo je treba, da ne onesnažujejo naknadno del prejšnjega. Še posebej pomembno, da se to stanje v prenosu alkohola v pripravkih ksilena. Zato dobimo dobro tekočo možganov ven, in če steklo zložene v parih, ki so nujno hkrati odklopiti in obrišemo hrbtno filtrirni papir ali krpo. To ne bi smelo biti dolgo, da dele v zraku, saj izsušijo ob istem času (tam je beljenje) in pristanišča.
Lahko povzroči dehidracijo in razsvetljenje kot prosto plavajoči odsekov in prilepili na steklo. Vendar, ko se prosto plavajoče odseki v močnih alkoholnih pijač in karbol-ksilena so krčenje, postanejo krhke in ni zravnajte, ko dajo na steklu. Torej, če je mogoče, prosto plavajoča oddelek (želatina, tselloidinovye in zamrznjeni) morate prilepiti na steklu do dehidracije in razsvetljenje. Za ta rezine preselil iz vode do 70% alkohola, pri čemer se zniža drsnik, na katerega s pomočjo čopiča (ali iglo) in zmanjšanje raztegljivim zravnajte. Zatem se steklo previdno odstranimo, je filtrski papir odstranimo okoli svetlo odvečno vlago in dobi močno pritisne nemoteno filtrirni papir navlažili z 96% alkoholom (lahko predhodno namazati stekla protein-glicerol). Nadaljnja obdelava poteka, nakapyvaya zaporedno dehidracijo in antirefleksijski rešitve, zbiranjem poglavji periodično navlažene filtrirni papir v alkoholu. To je potrebno, da bi se izognili dele sušenje.
Obdelava v bioloških lončki rezine prilepili x zgoraj opisan način, pogosto vodi do delaminacije.
Zaključek sekcije. Za dehidrirane in razsvetljenih drog najpogosteje uporabljenih za podpis medij je balzam, ki je prozorna, rumenkasta kolofonije. Balzam ima lastnosti zdravila konzervansov in ohranja preglednost ima lomni količnik blizu lomnega količnika stekla. Slednja lastnost je dobro viden s pogledom na stekleno palčko potopi balzam (odseka v smoli skoraj ni viden).
Obstajata dve vrsti balzamom - Kanadski in jelka. Postopek za pripravo le-teh: v kosu (ali kose) iz strjenega smole damo v čisto, suho, široko parkljevke stekleni čaši in ležišča ksilena (ali toluenu), dane v termostatu. Značilno je, da raztopino tekoče konsistence, ki jo filtriramo in pustimo v odprti posodi (prednostno v digestoriju). Kot topilo izhlapi balzam začne za zgostitev. Ko doslednost bo podobna tekočega medu, rešitev je pripravljena za uporabo.
Značilno balzam ima rahlo kisel reakcije. V teh primerih, kjer kisel medij prizadenejo barve, je treba uporabiti nevtralen balzam, ki je pridobljen z dodatkom majhne količine kalijevega karbonata ali natrijevega prahu. Balsam skladiščiti v širokih usti kozarce, zaprti z zapiralnimi pokrovi mletje namazati s tanko plastjo vazelina. Če ni nobene posebne steklenice, ki jih lahko uporabite majhno steklenico s širokim usta izpod zdravil, zatesniti prilagodljive vinilklorida zamašek. Središče vtikač vstavljen in je narejena luknja v njej stekleno palčko, s pomočjo katerega se vrniti balzam.
Metodologija. Po odstranitvi stekla z rezino ksilena, hitro obrisati hrbtni strani, in jih v vodoravnem položaju na mizi (ali katerokoli ravno stojalo), uporablja nekaj kapljic balzam. Potem pa vzemi kuhano pokrov steklo (čisto pinceto ali z oskrbo dva prsta na stranskih robovih, tako, da ne onesnaži površino), ga dal na slide poleg zdravila pod kotom 45 ° in, ko bo balzam širijo po robu pokrivalko, počasi znižala (sl. 80). Zrak se postopoma zamenja in balzam formulacija obsega tanek, enakomerne plasti. Krovnih je treba pripraviti vnaprej. Poleg dejstva, da mora biti popolnoma čist, bi morali biti razvrščeni v dobrem in slabem. Če so pripravki, ki jih je treba naslikal raziskati s pomočjo potapljanja cilja, ne more vstopiti v gosto zaščitnega stekla kot goriščna razdalja objektiva bodo manjša od skupne debeline zapornika zdravila, in poudarek ne bo dosežen.

Sl. 80.
sekcije Zaključek pod zaščitnega stekla.
Število balzam je treba izračunati na tak način, da je bilo dovolj le za pokrivanje celotnega območja pod pokrovom zdrsa. Če malo balzama, bo ostal prazen prostor med stekli, čeprav je veliko, rešitev bo treba razširiti na diapozitiv in ga lahko madež. V prvem primeru, boste morali dati kapljico balzama na diapozitiv na robu zaščitnega stekla, v skladu s katerim koli preostali zrak, in da bo zapolnila praznino. Če balzam tekla izpod zaščitnega stekla, mora takoj obrišite s krpo, rahlo navlaženo z ksilena. Ugotovila, zdravilo je na posebno ploščo in postavi na krovno obremenitve za 24 ur za ravnanje. Če je potrebno močno pritisniti (velika hrapavost zdravila), nato pa uporabite posnetke spodnje perilo. Zdravilo mora biti v vodoravnem položaju, ni manj kot 24 ur. Po zgosti balzam, lahko zdravilo treba dati nobenega položaja.
Skladiščenje. Hraniti histološki preparati morajo biti zaščiteni pred prahom in svetlobo. Najbolj primeren način - skladiščenje v posebnih škatlah s stojala. Mape za shranjevanje je manj primerna, ker ne izključuje prah in zahteva veliko prostora. Dobro posušene pripravki se lahko hrani v običajnih škatel (od sladkarije, cigaret in podobno. D.). V teh primerih se okno paroma zložen hrbet in je vsak par ločimo od naknadnih vodoravni trak debel papir. Potrebno make opozarja na zunanji površini škatle sten.
Možne napake pri sklepanju: a) se vsa zdravila obložene z drobnimi kapljicami prahu-všeč (nezadostno dehidracije) - je treba spremeniti rešitve povečati obezvozhivaniya- b) premičnine pester steklenih mehurčkov (zrak ujet na koncu) - če so mehurčki nameščena nad seciranje drog in lahka tlaka igle na pokrivalko ne izginejo, je treba obnoviti preparat- ta kozarec z drogo in potopi v ksilen hranijo tako dolgo, kot bo pokrov steklo drsi zelo enostavno ali n oddastsya premik seciranje igloy- c) priprava ali nazobčanimi navzkrižno oblikovana volumetrične fibrilov, na odseku razporejena določevanjem različnih vključki (kontaminacijo drog skozi proces raztopin kontaminirane balzam ali slabo očiščen krovno) - filtrirano raztopino previdno obrisati krovnih.