Načini barvil - osnova histologije

Video: Avtomatski stroj za barvanje Leica ST5010 XL

Obarvanje s hematoksilinom-eozinom (popravili)

Ta metoda je najpogostejša histološka v praksi, saj zaradi kombinacije barv, ki spadajo v dveh nasprotujočih si skupin, daje pregled stanja pregledanih organov in tkiv.
Hematoxylin - naravno rastlinsko barvilo, ki je topen v vodi, alkoholu in glicerin *.

Video: barvanje las: balayazh, shatush, Ombre, ki poudarja, niansiranje. Ozemlje slogu La Rouge

* Zadnji okoliščina je kontraindikacija za sklepanje, glicerol sekcije obarvali s hematoksilinom.

Rešitev hematoksilin ima osnovne lastnosti, povrnitev jedro razkriva strukturne dele, ki obsegajo nukleinske kisline. Vendar pa je barvilo ima lastnost ni Hematoxylin in izdelek je -gematein oksidacija.
Eozin - umetna barvila topna v vodi ali alkoholi, ima kisle lastnosti, madež celično citoplazmo roza.
Obstajajo številni načini priprave raztopine barvila hematoksilinom, vendar je njihovo bistvo je eno - njegova oksidacija.
Tu so najpogostejši recepti.
Kislo Ehrlich hematoksilin. V 100 ml 96% raztopine alkohola 2 g hematoksilinom, dodamo 100 ml destilirane vode, nato s 100 ml čistega glicerina, 3 g kalijevega galuna (kemično čista) in 10 ml ocetne kisline, stresamo in pustimo svetlobo "zrel" za 14 dni , občasno tresenje. Da bi zagotovili stalen dostop zraka (hematoksilin proces oksidacije), naj se plovilo široka usta in vstopni pokrov z več plasti Gaza. Postopek "zorenja" raztopine postane bledo rdeča temno rdeča. V dobro zaprti barvilo ohrani lastnosti za dolgo časa.
Hematoxylin Boehmer. V 10 ml 100% alkohola raztopimo 1 g kristalinične hematoksilinom in dodamo 200 ml 10% vodne raztopine ohlajena in filtrirana pepelika galunom. Rešitev je "zrel", v luči za 4-5 dni, nato ga je mogoče uporabiti. Pred uporabo raztopino barvilo filtriramo vsakič. Sčasoma se bo to pokvari.
Kislo gemalaun Mayer. V 1000 ml destilirane vode raztopimo 1 g hematoksilinom, dodamo 0,2 g natrijevega jodata (NaIO3), 50 g kalijevega galuna (kemično čista) in, ob stalnem mešanju, čakati na njihovo popolne raztopitve (fluid postane vijolično-modro). Nato 50 g Kloralhidrat in 1 g kristalnega citronske kisline, pri čemer je raztopina postane vijolično-rdečega. V dobro zaprti posodi kemično čiste steklene barvilo se shrani za dolgo časa.
Prednost te metode - hitre oksidacije hematoksilinom natrijev jodat, pri čemer raztopina ni potreben "zorenje" in se lahko uporablja neposredno za barvanje.
Priprava raztopine barvilo hematein: a) 1g tovarne hematein raztopimo v 50 ml 96% alkohola (z nežnim ogreva) - b) 5 g kalijevega galuna (kemično čista), raztopljenega v 1 litru destilirane vode. Nato se obe raztopini dekantiramo, filtriramo in dodamo malo timol (za konzerviranje). Uporablja se brez "zorenja". Raztopino dobro ohranjena v tesno zaprti posodi.
Priprava eozin 0,1 barvilom smo raztopili v 100 ml destilirane vode.
Pred barvanjem je potrebno pripraviti na delovnem mestu čisto opustitve pridelave vse nepotrebne predmete, nastavite mikroskop in osvetlitev za to, da se v določenem vrstnem redu jedi z ustreznimi tekočin, preverite "baterije" za odstranjevanje vode in beljenje, filter barvila rešitve, za pripravo premaza (in če potreba in predmet) iz stekla in tako naprej. d. Šele nato se lahko začne na madež priprave.
Tehnika obarvanje. Je treba začeti z opredelitvijo trajanja, saj je odvisna od postopka vezave, naravo in lastnosti zdravila in se barvila, itd Za ta namen odstranijo iz destilirane vode treh stekla z rezino .. (Vključitev zdravil za vodo. - glej predhodno poglavje) odstrani odvečno vlago okoli njih (sicer bo barva razpršeni po steklu in razredčimo z vodo) nameščen v vodoravnem položaju in nakapyvayut raztopine odpipetiramo barvila za dokončanje pripravka prevleke. Po 2 minutah, prepustna za obarvanje raztopine * iz ene od stekla in damo v destilirani vodi (za pranje odvečno barvilo). Ostali dve stekla osvobojeni hematoksilin 4-6 minut pred oz. Zatem brisanje notranjo stran stekla, je zdravilo šteje z nizko povečavo mikroskopa (če je potrebno, in za velike, prekriti s pripravo krovno). Ko jih obarvamo s pomočjo prosto plavajočih poleg področij kljuke prenesejo več rezine v barvo, zlijemo na urno steklo ali tehtiču nizko, in nato skozi so iste časovnih intervalih odstranimo, izperemo z destilirano vodo, izravnan na čisto mikroskopsko stekelce in vizualno opazili mikroskopom.
Možne izvedbe rezultatov a) osnovna pobarvane v bledo vijolično barvo brez jasno razlikovati mikrostruktur - priprava nedokrash e n b) jedra temno vijolično (skoraj črna, vendar z rdečkasto odtenek), strukturni elementi so nejasen, citoplazmo pobarvana tudi - priprava perekrashen- c) rdeče-vijolično jedro s posebnim nukleoli in kromatina, citoplazemskim svetlo nepobarvana - normalna obarvanjem.

* Barvilo zlijemo v posodo, kjer je bila sprejeta, saj je primerna za nadaljnjo uporabo.

Ob ugotovitvi optimalni čas hematoksilinom, v 3-5 minutah presežek barvilo oprati v destilirani vodi in ga namestimo droge v vodovodni vodi, kjer so pridobili modro barvo (10-14 min), zaradi blueing jedra v šibko alkalnem mediju (voda iz vodovoda lahko zamenja destilirana rahlo jo alkalize z amoniakom). Nato zopet je zdravilo postavljeni na 3-5 min v destilirani vodi.
Poleg zgoraj navedenega postopka progresivna hematoksilinom obarvanje jeder obstajajo metode regresije. Rezina prebarvali jedra po izpiranju v destilirani vodi postavi v 1-6 okisamo z 70 ° alkoholu (5-7 kapljice močne klorovodikove kisline na 100 ml alkohola) in je imela barvo mikroskop monitorja oslabitev (rdeče slabi in pomnoženi rdečkasto tonov jedra) . Nadaljnja konvencionalno zdravljenje.
Hematein madežev jedra in kisla gemalaunom Mayer dobimo na enak način, vendar se zdravilo posebej temeljito izpiranje potrebno, ker lahko ostanek neodstranjenih kisline motijo ​​barvanje.
Ob koncu izpiranja barvana s pripravo hematoksilinom v destilirani vodi, je ponovno ekstrahiramo in odvečno vlago odstranimo nakapyvayut raztopine eozinom. Čas obarvanost je tudi empirično izberemo s spreminjanjem izpostavljenost 1 do 4-5 min.
Možnosti so: a) barve citoplazmo in zunajcelični izobraževanje so komaj opazne rožnato ali rumenkasto odtenek - zdravilo nedokrashen- b) splošno ozadje intenzivno rdeče barve, mikrostruktura jasno vidno, jedrska meja je nejasen - zdravilo perekrashen- c) splošno ozadje zmerno rožnato-rumene barve, jedro jasno konturiruyutsya - barvanje uspešna.
Po eozin obarvanja končan, se barvilo zlijemo nazaj v steklenico (kot hematoksilinom in se lahko ponovno uporabi), priprava speremo z destilirano vodo, ki se izvede s pomočjo naraščajočih koncentracij alkoholov Carbol-ksilen, ksilen in vgrajeni v balzama.
Treba je znano, da eozinom zlahka speremo z vodo in alkoholov, nizki koncentraciji, zato ima zdravilo skozi tekočino mora hitro kratki le enkrat in le v 96% in 100% alkohola lahko hranimo 1-2 minut. Če je zdravilo prebarvali eozinom, nato odstranimo odvečno madež, povečuje pralni časa (v destilirani vodi) in vodenje skozi šibke alkoholov.
Za izboljšanje obarvanja lastnosti uporabljajo eozinom zakisljevanje barvanje z raztopino ocetne kisline (1 kapljica 3% ocetne kisline na 100 ml barvilom).
Uporabljene Zgoraj opisane dvojno obarvanje Metoda preverjanja droge, in drugi.
Tam barvila barvilo rdeče jedru (safranina, karmin alum) in citoplazemskim - zelena (zelena lučka), oranžna (Orange G).

Video: Metode deli začasne uslužbence

Obarvanje HEIDENHAINOVIH železa hematoksilinom

(Določitev, razen z najboljšimi rezultati po sublimata in kromirane ključavnice)

Iron hematoksilin za razliko od zgornje rešitve Hematoxylin madež ne le jedro, pa tudi različne citoplazemska in nekaj znotrajcelične strukture. Ta lastnost temelji na dejstvu, da se pred pripravo barvanje jedkano v raztopini železovega galuna, ki se zaznavajo različno različni fabric elementi. Naknadna obdelava vgravirano raztopina tkanine hematoksilin vodi do tvorbe črno vlaka gemateinovogo premazom, ki v procesu diferenciacije rezine delno iz tkiv nazaj v raztopino. Tako je vrsta železa barvanjem s hematoksilinom - tipično regresivno barvilo.
Iz navedenega izhaja, da se je s spreminjanjem čas jedkanja, obarvanje in razlikovanje mogoče dobiti drugačen končni učinek glede na cilje študije (ugotovili samo jedrske strukture, ali oboje citoplazme in zunajcelični nastajanja) Iz tega sledi.
Priprava raztopin. 1. Raztopina železovega galuna. Raztopimo 10 g železovega galuna (sulfat, železov amoniak) v 100 ml destilirane vode. Lahko jesti le rahlo rožnati kristalov. Izogibati se je treba rumena, zelena, belkaste kristali.

1. Hematoxylin raztopina. Raztopimo 1 g hematoksilinom v 10 ml 96% etanola in razredčimo z destilirano vodo do 100 ml, ugotavlja nivo tekočine v posodi, in pusti, da "zrel" za 4-5 tednov, ki zagotavlja stalen dostop svetlobe in zraka (pri tem je potrebno za pokrivanje vratu vsebnika zloženega več plasti koprivnega platna in kot uparjenju dodamo vodo na začetni nivo). Rešitev v času zorenja svetlo rjava do temno rjava spreminja. Pred uporabo raztopino razredčimo z enako količino destilirane vode.

Če je potrebno zagotoviti rešitev hitro kuhanje hematoksilinom (brez naprava), potem k raztopini, pripravljenega po zgornjem recept, dodamo 0,1 g natrijevega jodat (NaIO3), ki hitro oksidira v hematoksilinom in hematein prodira barvilo primeren za uporabo v 1 uri po rekonstituciji .
Nosilni obarvanje. Predhodna obdelava. odseki so v destilirani vodi, prenesemo v 2,5% raztopino železovega galuna (pripravimo z razredčenjem z destilirano vodni vir 10% -no raztopino) in pustimo 3-12 ur.
Jedkanje proces lahko bistveno pospešimo (do 1-3 minut), tako, da se vsebnik z rezinami v termostatu pri 37 ° C Ob koncu raztopine za jedkanje je shranjena.
Madeži. Po spiranju z destilirano vodo, so odseki damo v razredčeno (dvakrat) hematoksilinom raztopino za 1-36 ur, do popolne Pocrnjenje (prebarval bolje kot nedokrasit). Kot pri oblačenju, lahko čas barvanje skrajšati (2-3 ur - 30 min) z namestitvijo vsebnika z rezinami barvanje v inkubatorju pri 37 ° C
Diferenciacija. To je najbolj pomembna faza obarvanosti. Obarvajo odseki smo temeljito sprali v dveh ali treh delih destilirane vode (7- 10 min) in damo v raztopino železovega galun, služil za jedkanje. Stopnja diferenciacije redno spremljati pod mikroskopom. V tem poglavju je nato spere z destilirano vodo in obdelamo na želeni povečavi (do vodne potapljanjem, prekrita s krovno pre). Če diferenciacija Postopek hitro, je treba zmanjšati koncentracijo železovega raztopine alum, jo ​​razredčimo z destilirano vodo.
Po pridobitvi želenega stopnjo obarvanosti sekcije temeljito izperemo v teku ali večkrat zamenljivim tekočo vodo za 10-12 minut (nezadostno razlikovanje pranje tekoče formulacije, ki izhajajo iz razbarvanje), nato speremo z destilirano vodo, dehidrirani, in vgrajeni v osvetljevanje balzam.

Hiter način obarvanja z železa Hematoxylin Gurvich

V primeru potrebe po takojšnjem obarvanja odsekov s hematoksilinom HEIDENHAIN železa, ki se uporablja v postopku hitrega Gurvich (iste reagente).
Po odstranitvi steklo iz rezine destilirane vode, osušili rezine gladko filtrirni papir in prekrili z 2,5% raztopino železovega galuna. Nato se hrbtna stran stekla segrevamo preko alkoholnem gorilniku za pare (ne pregreje!), In daje malo ohladiti postopku segrevanja se ponovi 2-3 krat. Potem smo galun izprazniti brez pralni rezine nakapyvayut hematoksilinom in ponovno segreje do pare. Obarvani vodi do rez ne pridobi modro-črne barve. To nato dobro speremo z destilirano vodo zlijemo aluminij in sledi potek diferenciacije v mikroskopom. Po končanem diferenciacije rezine previdno izperemo brez galuna (v dveh ali treh zamenjavama destilirane vode in nato v teku), dehidrirani, in vgrajeni v osvetljevanje balzam. Pri delu z brezplačnim plavajočo oddelku je priporočljivo, da jih takoj nalepite na steklu po odstranitvi iz vode in ravnanja barve, kot je opisano. predelavo delov more dati neenakomerne barve v prosto plavajoče stanju.
Splošne pripombe. Zgornji opis jedkanje, barvanje in diferenciacija je odvisna od mnogih dejavnikov (kakovost reagentov preučevali lastnosti objekta, namenov in ciljev študije in t. D.) in je določena empirično v vsakem primeru. Najpomembnejša faza obarvanje je diferenciacija, saj posamezne strukturne komponente celic in tkiv v različnih hitrostih vračati nakopičene barvilo. Najhitreje razbarva homogeno del citoplazmo in nato zrnate komponente in vsaj strukturni elementi jedra.
Pri delu s tselloidinovymi rezine najprej sprosti zdravilo iz Keloidin (glej dok. Ustrezni odsek), saj je precej obarvana z železom hematoksilinom in brezbarvna med diferenciacijo. Raztapljanje je treba izvajati Keloidin pred jedkanja v železovega galun, saj po topnost znatno poslabša.

Video: Del 29. Težave v coloristics. Sedin. 1. del.

Označitev diapozitivov

Po delilna etikete (ali tik pred njim) na drsniku, je treba uporabiti za ustrezne simbole. To je še posebej pomembno v serijskih oddelkih in obdelavo poskusnega materiala. Specifična vsebina pojasnilih odvisna od narave študije in nastavitve, ki v določenem laboratoriju. Najbolj zanesljiv način - vytsarapyvanie posebnih znakov svinčniki konico s tipom težko kovinsko "zmago". Manj zanesljive napisi črnila. Obstajajo različne tehnike za črnilo pri zdravljenju v tekočih medijih ne spere ali zamazan: a) pred lepljenjem poglavji en konec drsnika, naoljena protein glicerolom segrevamo na ognju, dokler se dim po ohladitvi nanese na aktivni del zahtevanih simbolov in spet segrevamo nad plamenem- b) nanašanje ustreznega napis, in nato spusti v tem delu okenskega 1-2% Keloidin raztopino za tvorbo zaščitnega filma in podobno. d.