Priprava in madeži krvi brisa za število levkocitov - osnova za histologijo

Za morfološko analizo krvnih celic in levkocitov štetje krvi brisa pripravimo. Pravilno narejeno in dobro obarvajo, bris je nujen pogoj za pridobitev zanesljive rezultate v študiji morfoloških značilnosti krvnih celic in levkocitov štetja. Kri brisa morajo izpolnjevati naslednje pogoje: 1) začne na 1 cm od začetka in konca drsnika na razdalji 2-3 cm od njegovem nasprotnem robu, mora biti celotna dolžina kapi pokritje 1 / 2-3 / 4 stekla- 2) imajo enako debelino, namesto valoviti, dobro bris debelejši le na začetku, nato pa postopoma stanjša konca proge ( "ogled ščetke") - 3) v krvi sloj ne sme doseči robove stekla, med njo in robom stekla mora biti vedno nekaj milimetrov prostora.
Strokes presegajo 3/4 dolžine toboganom, so zelo debele. So debela plast rdečih krvnih celic, pritisnjeni drug proti drugemu in tvorita kovanca stolpce, ki preprečuje raziskovalci menijo njihovo morfologijo. Kapi krajši Vi drsnik pretanek: bele krvne celice so zelo redki in se deformira. Če ni proste razmaz rob drsnika (kar se zgodi, če velik premer mletje steklo), so velike celice premakne na rob kapi, kar ima za posledico njej neenakomerno porazdeljeno.
Val podobno porazdelitev krvnih celic razmaza tudi narobe - debela odstavki vsebujejo več limfocitov, tanke - več monocitov in segmentiranih celice.
Priprava tehnika bris. Diapozitivi, ki bo krvnih madežev, je treba dobro razmasti in oprati. V ta namen se dajo v raztopini kalijevega dikromata (zmes K2Sg2O7 + močna H2 SO4) za 24 ur (z Chrompick je treba ravnati previdno, saj lahko škropljenje z opeklinami oblačil, nogavice). Nato se je steklo sprali pod tekočo vodo za 24 ur, obrišemo do suhega in ga damo v posodo z zmesjo etra spirt-. so pred uporabo posušijo. Z kapljico krvi dotaknil drsnik tako, da se ne dotika s prstom. Kapljica krvi na steklo prehaja. Za brisa je vrednost 1 / 2-3 / 4 drsnika, mora biti premer kapljic biti 2-5 mm. Steklo slide sprejeti v levem palcem, kazalcem in sredincem tako da kapljica krvi je bila na vrhu. Brušenega stekla, ki bo kap, oddanih 30-45 ° kot na razdalji 1-2 mm pred padcem, ki imajo svoj palec in kazalec desne roke. Cut steklo je zdrsnila nazaj, tako da se je dotaknil kapljico kapljico krvi in ​​se širijo v kotu med tlemi in tobogan (nazaj gibanje prav tako pomaga, da odstranite odvečno kri, če je padec prevelik). Potem pa hitro naprej gibanje roke, da je bris. Zato je potrebno, da je v pripravi stikom palcem in kazalcem desne roke zdrsnila na robu drsnika in ustvariti potrebno podporo za uvedbo enotne plasti krvi. Cut steklo mora biti ožji od cilja, da drsi robovi so brez kapi.
Če so tla steklo je enaka širini kot predmet, vogale odlomljen na stekleno krajšanje 1-2 mm. Cut steklo se lahko nadomesti s pokrovom.
Priprava dobrega bris krvi, čeprav ni težko, zahteva določeno spretnost. Ne smemo pozabiti, da je to narobe kuhana kap vodi do resnih napak v rezultatih raziskav. Kakovost brisa je do neke mere "potrdilo" deluje laboratorij.
Obarvanje krvnih madežev. Pripravljena na ta način posušimo krvne madeže in se nato pritrdi z metanolom (3-5 min) in absolutnim etanolom (100%) (10-15 min) ali acetonu (5 min). Najboljši rezultati so vedno pritrditev madeži metilni alkohol *. Pritrdilno tekočina denaturira celične proteine ​​hkrati obdržale doživljensko strukturo in fiksnih razmaže na steklene ploščice. Neposnetih madeži zlahka spere.

* Opomba: metanol je močan strup, in aceton-vnetljiva in eksplozivna tekočina, zato ne more zapustiti delovnega mesta (pred uporabo in po njej), posoda biti jasno označeni in shranjeni v raztopini mora biti varna.

Video: krvne celice: rdeče krvne celice, bele krvne celice (Nauchfilm, izobraževalne video ZSSR)

Pritrdilni tekočino zlijemo v zadostni količini za steklo ali steklo z madeži potopimo v kozarec preparata za fiksiranje. Po določitvi in ​​sušenje madeži začnejo njihovi barvi. Romanovsky-Giemsa metoda se običajno uporablja. V laboratorijih, je vedno pripravljeno raztopino razredčimo barvilo. Romanowsky-Giemsa barvanje sestavljen iz delov (eozinom) kislih alkalnem (Azure II) in. Azure II madež celično strukturo, v svetlo modri in eozinom za rozovokrasnogo. Alkalne deli celice vezani in obarvamo s kislinskimi barvili in kisline - alkalno.
Raztopino dela barvila pripravimo z razredčenjem končno destilirano vodne raztopine (1-2 kapljic črnila na 1 ml destilirane vode). Za dobro brisa barvanja kakovosti glede na barvo, vodo in reakcijsko temperaturo. Pomembno je, da je destilirana voda, v kateri je barvilo raztopi, nevtralne reakcije. Če je reakcija kislo, so učinkovanju alkalijskih šibko barvanje komponent belih krvnih celic obarvajo slabo in zdravilo postane rdeča. Če je voda alkalna, slabitev vpliv kislega elementa barvila, so levkociti obarvajo premočan in zdravilo modro. Reakcija je spremljana s hematoksilin vodnem vzorcu. V 4-5 ml vode smo vržena pelet hematoksilinom. Če ima reakcijska voda tselochnuyu nato obarvana prej kot 3 minute. Če se po 5 minutah opazili madež, ali pa ne pride, potem je voda kisla. Če je voda naslikal po 1-4 minut v roza-vijolične barve, je nevtralna in je uporabna. Ko je kisla vodo ji po kapljicah dodali 1% raztopino natrijevega karbonata, dokler karakteristiko hematoksilin vzorca ne postane nevtralna voda. Ko je alkalna reakcija kapljicah 1% raztopine ocetne kisline dodana. Da bi lahko pravilno ocenili rezultate vzorca, naj bi kozarec vode, se dajo na list belega papirja.
barvanje madeži proizvedeni po metodi Romanowsky-Giemsa takole. Pred barvanjem, morate najprej preveriti kakovost barvil, barve in si nekaj udarcev, da nastavite čas za najboljšo barvo. Rešitev Delo barvilo pripravljena tik pred barvanjem. Zdravila smo dali na tla in kapi 2 stekla (lesenih) palice, ki jih na dnu petrijevkah. Pour barve v pripravi. Obarvajo 20-40 minut. Potem smo brisa sprali pod tekočo vodo, posušimo in mikroskopiruyut.
Ko obarvajo krvnih madežev na metodi Romanovsky-Giemsa se rdeče krvničke pobarvana v bledo roza, celične jedra - v modro-vijolično granul eozinofilcev - v svetlo rdeče, bazofilcev - moder citoplazmo limfociti in monociti - modro.

Video: haemoscanning -"živeti" kapljico krvi pod mikroskopom TS