Leptospira - mikrobiologija s tehniko mikrobioloških testov

Leptospira so povzročitelji akutnih infekcijskih bolezni - leptospiroza, ki inficirajo človek, glodalci, govedo, ovce, svinje, psi in druge živali.
Prvič so odkrili patogen Leptospira leta 1914, ki ga Japonski raziskovalci Inada in Ido, ki jim je bila izolirana iz prašičjih organov v morskih onesnaženih s krvjo bolnikov z nalezljivo zlatenico. Te spirohete so poimenovali jih Spirochaeta icterohaemorrhagiae.
Leta 1928, SA Tarasov izolirani patogen voda mrzlici Leptospira grippotyphosa. To ime je dobila zaradi Leptospire nekaterih kliničnih podobnosti vode mrzlice z gripo, in delno s trebušnim bolezni.
Dve oblike leptospiroza: zlatenica infekciozne ali Vasileva-Weyl bolezen (ikteričnih leptospiroza - patogen L. icterohaemorrhagiae) in anicteric leptospiroza (vodna kuga, košnjo, vročina Daleč et al.), Ki so ga povzročajo različne Leptospira L. grippotyphosa L. Batavia povzroča L. canicola, L. DBA sod.
Morfologija in tinctorial lastnosti. Glede na morfološke in kulturnih dobrin vsem Leptospira podobni. Leptospira so značilne zelo majhne številnih kodre. Leptospira Dolžina 6-9 um in debelino 0,25 mikronov. V centru so nekoliko debelejše in raztegne proti koncu. Nedavni končne Nižinski zgosti (sl. 108). Leptospira imajo aktivno mobilnost. Vsebujejo leta je njihovo telo zelo majhna in zato težko nukleoprotein poslikano (Romanovsky roza ko serebrenii- v rjavi ali črni barvi). Poleg tega te metode barvanja tako spremeni strukturo Leptospire, ki prepozna jim postane zelo težko. Zato se uporabljajo za raziskave na področju glede na tempo (v državnem živi) metode za njihovo odkrivanje.
Gojenje. Leptospira Kulturo smo enostavno dobili na mediju, ki vsebuje minimalno količino proteina.

Sl. 108. leptospiram nalezljiva zlatenica (čista kultura).

Naslednji gojišča se uporabljajo za gojenje Leptospire:

1. Pepton raztopina pod tekočo vodo (1: 1000), z nekaj kapljicami metafosforne kisline.
2. Ulenguta medij sestoji iz sterilne vode iz pipe z 10% kunčjega seruma, segrevamo pri 56-58 ° C 30 minut.
3. Fosfat-serumski medij TERSKIKH - mešanica 10 ml Vi5 M raztopino Na2HP04 in Vis M KH2P04 raztopine z 90 ml destilirane vode: Zmes steriliziramo in dodamo 10% toplotno kunčjega seruma.

Sreda po semenske prekriti s plastjo tekoči parafin ali vazelin olje. Prvi dnevi setvijo je priporočljivo, da pri temperaturi 32 ° C, v naslednjih nekaj dni - pri 25-28 °. Rast Leptospira se začne na dan 5 ali pozneje. Leptospira ne povzročajo juhe motnost. Prisotnost Leptospire je določena z mikroskopskim pregledom v temnem polju pogleda.
Odpornost. Ogrevanje ubija spirohete v vodo za 30 minut pri 50-55 °.

Anicteric leptospiroza - voda mrzlica se pojavlja bolj benigna, brez učinkov zlatenica in krvavitev. 4-7 dni bolezen v območju ključnico včasih se zdi, polimorfne izpuščaj, ki se postopoma širi na trupu in okončinah. Po 2-3 dni, izpuščaj izgine. Temperatura se bodo za približno teden dni. Običajni izid bolezni - okrevanje.
Imuniteta. Rekurentne bolezni so redke. V krvi bolnikov, kažejo leptospiroliziny in aglutininske.
Mikrobiološka diagnoza. Material za laboratorijske študije je bolnikova kri v prvih dneh bolezni v prisotnosti visoke temperature, urin od 10-12 th dan, ko meningealnimi pojavi likvor, glede na epidemiološke indikacije vode, hrane, razpadajoče materiala (trupla ljudi in živali leptospiroza) .
Uporabljeno: 1) Postopek mikroskopska preiskava, 2) proizvodno gradivo na gojitvenem mediju, 3) serološke metode preiskovanja in 4) biološki vzorec.
Za mikroskopska raziskava krvi njene mase (2-3 ml) iz vene v brizgo s 4 ml 1,5% raztopine natrijevega citrata. Zmes zlijemo v epruveto, centrifugirali, oborino ločimo. Urin, hrbtenična tekočina se lahko raziščejo brez zdravljenja ali po centrifugiranju več ur pri 4000 vrt / min. Po centrifugiranju je tekoči odlijemo in pelet preučiti. Kapljica testnega materiala pa se nanaša preko tankih diapozitive (ni debelejši od 1 mm), prekrita s pokrivnim steklom (ni debelejši od 0,2 mm). Nastala zdravilo "zdrobljena" kapljice šteje v temnem polju. Pripravek, ki bo viden tanek Srebrnobela mobilne Leptospira.

Ker mikroskopska raziskava zagotavlja majhen odstotek pozitivnih rezultatov, je treba dodeliti čisto kulturo Leptospire. Pacient vzamemo kri iz vene (5 ml) smo inokulirali v 3 cevi (2 ml, 1 in 0,2 ml) v mediju brez seruma. Kri sama vsebuje dovolj hranilnih snovi za rast Leptospire. Urin in likvor zasejemo na 0,5-1 ml v 3-4 cevi mediju, ki vsebuje serum zajec. Iz človeškega ali živalskega trupla sprejme majhne koščke ledvica, vranica, jetra, možgane, tla, porcelanski malto z 2,3 ml fiziološke raztopine. Vse to počne, je sterilen. Nastalo suspenzijo smo vlili v cevi poravnana 1 uro. Mikroskopiruyut Supernatant topsheet, nato inokulirali z 1 ml hranilnega medija v cevi 3-4. Pridelki dani v termostat in vsakih 5 dni (za 3 mesece) od njih, priprave za mikroskopijo v temnem polju.
Pri setvi kontaminirana snov (usedlina urin, vodo in t. D.), skupaj z reprodukcijo Leptospire opazili tuje rasti mikroflore. V teh primerih, da dobimo čisto kulturo Leptospira 3-4 ml se preskusna snov dajemo intraperitonealno gvinejske svinje. Po 10-15 minutah, je krvavel iz srca in se širijo na gojišču brez seruma.
Ko se je bolnikova krvna kulture v 80% primerov pozitiven rezultat.
Serološki diagnostiki leptospiroza temelji na odkritju aglutinini in dopolnjevati-lizina protiteles v serumu pacientov (od 2. tedna po bolezni). Aglutinacije - liza formuliran kot sledi. Serum razredčimo 1: 50 do 1: 10 000 in zlijemo v 0,2 ml (štiri kapljice) v malih epruvetah aglutinacije določene v množico vrstic (število serotipov spirohete Leptospira, ki je dana reakcija). Za vse cevi vsake vrstice dodamo enako količino žive kulture Leptospira posebne vrste L. ictefohaemorrhagiae, L. Kazan., L. Weil- L. canicola, L. Batavia, L. grippotyphosa L. DBA L. kasachstanica sem in sod.
Kontrolne cevi namesto seruma zlijemo v 0,2 ml fiziološke raztopine in 0,2 ml kulture Leptospire. Epruvete smo stresali in čaka na 2 uri v termostatu pri temperaturi 25-30 °. Z vsako epruveto pripravimo zdravilo "stisnjena" in padca polje Stopnja mikroskopiruyut.

Sl. 109. aglutinacijo in liza Leptospire.
1 - nadzor-2 - aglutinacije leptospir- 3 - začetek lizo - zrnata
gniloba.
V prisotnosti protiteles v serumu od prvih razredčitvah opazili lizo: popolno raztopitev Leptospire, delni razpad ali granul otekline. Nadaljnje razredčitve zdi agglyutinatsiyu- kopičenju Leptospire kot "pajkov" (sl. 109). Diagnostična vrednost pozitivno reakcijo v razredčino seruma 1: 400.
Pri oblikovanju komplementa bolnikov fiksiranje serum razredčimo 1: 10, 1: 100. antigen kultura spirohete Leptospira ali avtolizata.
Do 3 ml biološkem vzorcu je pacientova kri v obdobju kuge 5-10 ml urina ali cerebrospinalni tekočini, 1 ml suspenzije organov človeških ali živalskih trupel morskih prašičkov intraperitonealno dajemo. Slika bolezni in rezultati obdukcije umrle morskem prašičku so opisani zgoraj.
Zdravljenje in preprečevanje. Zdravljenje leptospyrozov izvedemo s penicilinom. Priporočljivo je, da uporabljate v serumu imunizirani Leptospira konj ali okrevališča serum.
Preventivni ukrepi splošne narave vključuje: sanacijo endemičnih območjih nalezljiva zlatenica, poveča kislost tal in dezinsekcija. Posebno profilaksa je uporaba cepiva, ki obsega toplotno ubili Leptospira 3 vrste (ikterogemorragiya, gripi tifozi in Monakova).