Davica - mikrobiologija s tehniko mikrobioloških testov

Prva davica bacil Corynebacterium diphtheriae) je opisal E. Klebs leta 1883, in F. Leffler - 1884
Morfologija in tinctorial lastnosti. Bakterije se razlikujejo izrazit polimorfizem. Običajno imajo dolžino 3-4 mikrometrov in 0,3-0,5 mikroni v debelini (sl. 83 in 84).

Sl. 84. razmaz difterijskega filma. Prevleka metilen modro (enostopenjski proces).
Sl. 83. diphtheritic palica kultura slikanje s Neisseria.

Sl. 85. Kolonije davici bacilov o telluritovoy
okolje.
in - tip kolonija gravis- b - tip mitis kolonije.

Najboljši gojišče za gojenje davičnih bakterij je zložen konja ali goveji serum. Na tem mediju, kolonije davice bacili je mogoče ugotoviti s 8.10.14 ur. Kolonije krožno obliko konveksne nekoliko povišane v središču in s premerom največ 1 mm. Površina kolonije je gladka ali rahlo zrnat, smetanove barve. Na obodu kolonije so bolj pregledni kot v sredini. Kultura raste kot ne združi s seboj kolonij, ki ji daje rahlo obliki kosov (shagreen).
Vrste davice bakterij. Na podlagi kulture in biokemijskih lastnosti treh vrst palice davici: gravis, mitis, intermedius. Z vrsto razlik patogenov, povezanih v klinično sliko bolezni. Menil, da se tip davico gravis palice v hudih primerih, strupena. Tvorijo na telluritovoy mediju (agarja s krvjo in kalijevega tellurite) relativno velike serovatochernye ali črne ravne, surovih kolonije z radialnim ischerchennostyo in nazobčanim robom (sl. 85) za brozge dobimo zrnat oborino in filmske razgradljive škrob in glikogen, hemoliza ni povzročil . Palice tipa mitis v primerih, ko so skupni toksični učinki blagi, čeprav lahko tonzile filmi precej velika. Tvorijo v telurjeve-agar gladkih konveksnih majhne sijoče kolonij
saj s gladek rob, enakomerno premešamo brozge, škrob in glikogen ne razkrojijo, gemolitichny. intermedius Tip zavzema vmesni položaj med gravis in mitis. Tip Intermedius bakterije rastejo slabo in tvori majhno ravno črno kolonijo s prozorno meji na robu. V sredo Tyndall (cistin-tellurite - serumski medij) so kolonija davice bacili obdan s halo temno rjave. Trenutno pa je bilo ugotovljeno, da je klinični potek bolezni je pogosto odvisna od tipa davice bacil. Vse vrste davici bacilom z glukozo, maltozo, galaktoze razgradi, da tvori kislino, nima izhajanje plinov. Laktoza, saharoza, manitol, in ne razpadejo.
Diphtheroids in lozhnodifteriynye bakterije. Naslovom "diphtheroids" pogojno Združene coli, davica morfološko podobne, vendar pa ni toksične lastnosti. Najdemo jih na koži in sluznicah zdravih ljudi. Ta skupina vključuje Corynebacterium kserozo, Corynebacterium akne et al.
Na sluznico ust, nosu, nazofarinksa pojavi lozhnodifteriynaya coli - Corynebacterium Hoffmani.
Posebne težave pri katerih se razlikuje od davici bacilov izkušeni tehnik mikrobiolog ne čutijo. Na primer, palico Hoffmann krajši in debelejši, nima polimorfizem, ki se nahaja v parih ali palisade, nima zrn volutin. Corynebacterium kserozo razliko davici bacilom ima nekaj zrn volutin. Drugi diphtheroids dimenzioniranje manj davice bacillus, nimajo polimorfizem, so razporejeni med seboj pod kotom ali palisade, nima zrn volutin ali le eno zrno na enem polu celice.
V primeru dvoma je treba zateči k študiji biokemijsko aktivnost izoliranih kultur in toksičnost.
Telluric medij. 1. krvni agar telluric EU. K 100 ml stalimo in ohladimo na 50 ° 2% mesno-peptonski agar (pH 7,6) smo dodali 5-10% defibrinirane človeške ali živalske krvi, in 1 ml 2% raztopine kalijevega tellurite (KgTe04). Medij je temeljito zmešamo in zlijemo v skodelico. V tem okolju, zmanjšana davice bakterija kalijev tellurite do kovinskega telurja.
On-tellurite agar krvi kokalna bakterije skupina raste počasi. Aureus kolonij do konca 2 dni postala velika siva ali črna z rjavo obarvano. Coli kolonije Hoffmann do konca 1. dan rasti - gladka, sluzi s črnim sredini in sivo na obodu, na 2. dan je celotna površina kolonije postane črna.

1. sreda Clauberg. 100 ml 3 agarja% hranil (ali 7,5 g suhe hranilnem agarju s 100 ml destilirane vode) raztopi, dodamo 3 ml 2% -ne raztopine kalijevega tellurite 10 ml glicerola in 50 ml mešanice laka krvi. Hitro vse zmešamo in zlijemo v skodelico. Medium je jasno, barva rdečega vina.

Lakiran kri pripravili takole: 34 ml destilirane vode (sterilne), dodamo 16 ml defibrinirane goveje krvi ali posušena kri ali navodilo humani razredčili oz.
Priprava mešanice glicerola: 40 ml defibrinirane goveje krvi ali človeške krvi ali razredčili suhega dodamo 20 ml sterilnega glicerola kemično čista. Zmes priporočljivo stati v hladilniku za 3-6 tedne. V tem okolju, davica bacil regeneracijo telurjev sol raste v obliki okrogle neprozorne kolonij s črno ali temno sive sredini. Lozhnodifteriynye motno palice tvorijo majhne kolonije sive barve z rjavo center. Diphtheroids rastejo v obliki konveksnih sijoče sive kolonij s črno centra.

1. Cistin-tellurite-serumski medij Tyndall (Spremenjen po navodilih). Za 100 se doda ml 2% staljenega in ohladili na 60 ° hranilnem agarju zaporedoma: 1) 1% raztopina cistina v 0,1 N raztopine H2S04 (ali HC1) - 12 ml-cistin ni treba raztopimo v žveplovo ali klorovodikovo kislino, segrevamo na vodni kopeli pri temperaturi 80-85 °, 2) 0,1 N. NaOH-raztopino 12 ml, in 3) raztopino 2% kalijevega tellurite 1,8 ml, 4), 2,5% raztopina natrijevega hyposulfite 1,8 ml, 5) normalni konji ali goveji serumski - 20 ml. Medij mešamo in zlijemo v sterilne Petrijeve plasti 4-5 ml.
2. Kazalec suha hinozolnaya sreda zagrešili B (po navodilih). K 100 ml hladne vode dodamo 8,7 g suhega prahu hipozolnoy mediju, temeljito zmešanega in ogrevano nad nizko toploto do popolnega taljenja agarja. Medij pustimo vreti 2-3 minut, ne omogoča agar palico, da tvorijo krupnopuzyrchatoy hitro usedanje peno.

K ohladimo na 50 ° medij dodamo 5 ml (prednostno 10-15 ml) sterilnega krvi, mešamo in vlije v skodelico.
Po strditvi medija nekoliko osušimo v peči in je "se lahko uporablja v 3-4 dni pri temperaturi med + 4 ° C in +10. Kuhan medij ima modro barvo. Kolonije davice bacili rastejo v 24-48 urah, in kazalec se zmanjša in postane okolje vijolična namesto rasti davice bacilov. Kolonije davice bacili se obarvajo modro.
Odpornost. Temperatura 60 ° davice bacil ubije v 10 minutah. Neposredni sončni svetlobi in svetlobe okolice palico davice občutljive.
Po sušenju je relativno stabilna. 5% raztopina karbonskega kisline ubije 1 minuto.
Toksin davice in patogenosti pri živalih.
Razporeja exotoxin davice bacillus, katerega toksičnost je lahko tako velik, da je 0.002 ml podkožno morski prašiček povzroči smrt živali po 3-5 dneh. Toksin davice je zelo krhka: se uničijo s segrevanjem do 60 ° ter z učinkovanjem svetlobe in atmosferskim kisikom močno oslabljen. Pod vplivom hkratno delovanje formalina (0,3-0,4%) in temperaturi 40 ° med 1 meseca mogoče dobiti - toksoid. Toksoid se uporablja za aktivno imunizacijo proti davici in ljudi v proizvodnji terapevtskega serumov.
V nasprotju z toksin toksoidni dovolj miz: pod vplivom delovanja svetlobe na dolgotrajno skladiščenje in njegovo antigensko moči ni spremenilo.
Najboljše okolje za nevtralizira je ognjišča juho (gl. Str 67). Moč toksina je določen z najnižjo smrtnega odmerka - .. Dim, to je najmanj količina toksina, ki uničuje podkožno gvinejske svinje, ki tehta 250 g na 4. ali 5. dan. Živali ne morejo dobiti bolezni, podobno človeški davici. Vendar je v nekaterih živalih, zlasti pri morskem prašičku, potem ko so okužene razvoju več visoko značilnih bolezenskih sprememb. Kot rezultat subkutani injekciji davičnih kultur ali žival umre toksin davice v prihodnjih dneh. Na obdukciji na mestu vboda pojavi resni ali serosanguineous infiltrirajo. Nadledvične žleze so razširjene in hiperemika ostro. V plevralni votlini, je osrčnik in peritonealno votlino opazili kopičenje seroznega tekočine.
Ko intradermalno dajanje toksin davice ali kulture obstajajo posebne lokalne nekrotične lezije kože.
Patogeneze in klinične davica. Vir okužbe v davici je bolan človek, ki je po razporeditvi - sluz, gnoj, slina, izpljunku bakterije razblini v okolici prostora, okolja in predmetov. Najpogosteje, okužba se zgodi s kapelnoaerogennym. Nevarnost je tudi rekonvalescente Šentvid pri Stični in zdrave bacillicarriers. davica
palice je mogoče shraniti za dlje časa v grlu ljudi, ki so imeli proti davici. Bacteriocarrier v davici je zelo epidemiološkega pomena: to naredi imunski sistem in hkrati prispeva k širjenju okužbe.
Davica se prenaša s kašljanjem, kihanjem in se pogovarjam s bakterijami prevoznikov, kot tudi posredno - s pomočjo različnih predmetov, ki so bili v uporabi bolne osebe (spodnje perilo, posteljnino, igrače, knjige, jedi). Prebavni pot okužbe (preko mleka in sladoled), pojav redek.
Patogeneza difterijskega bistvenega zastrupitev z difterijskim eksotoksin. Davice se kaže v obliki primarnih lezij sluznico mandeljne, Palatinski zavese, nosu, grla in nosu, kjer lahko postopek širi globlje v respiratornem traktu, ki vplivajo na grlo in bronhije. Včasih je tudi davica oči, rane površine, uho in vagina. Na mestu uvedbe mikrobov prikažejo sivo folijo, privarjena biti tkanyu- ko ji odstranili vidno površino krvavitev.
Reprodukcija davice palice pojavi le na mestu izvajanja, in v krvi, so na splošno ne prodajajo. Namesto razmnoževanje bakterij proizvajajo davico exotoxin, ki je namočena, daje splošno zastrupitev organizma.
Inkubacijska doba za davičnih 2-7 dni. Bolezen se prične dvig temperature, bolečine v grlu pri požiranju in slabo počutje. Toksin vpliva na srčno mišico (majhna in hitro impulzov, pridušen toni). Krvni tlak zniža zaradi uničenja nadledvične žleze. V prihodnosti, v hujših primerih davici zdi, cianoza, hladne okončine, in smrt nastopi akutno srčno popuščanje.
Davica grla ali pravega križa, označen s suhim skorja kašelj, zoženja lumnu grla, anoksije, konča s smrtjo. Strupene zapleti pri davici so mehko nebo paraliza, udov in različne myshts- posebno nevarne srčne mišice paraliza.
Skupaj s težkimi izpolnjeni pljuča, atipičnih oblik davici, ki potekajo pod krinko različnih
vnetje mandljev. Takšni primeri so težko odkriti in zato zelo nevarna v epidemiološkem smislu.
Imuniteta. Imunosti proti davici antitoxic. Temelji na prisotnost protiteles v serumu od - antitoxins. Dojeni dojenčki ponavadi ne zbolijo z davico, zaradi svoje obstoječe pasivne imunosti, ki jih prejmejo od matere preko posteljica in deloma z mlekom. Kasneje antitoxins kopičijo zaradi aktivno imunizacijo in zemeljskega stika z nativno davici bacillus.

Mikrobiološka diagnoza. V davici, naslednje vrste laboratorijskih raziskav: bacterioscopic, bakteriološke, eksperimentalno. Material za študijo so okuženi izločki sluznice, filmov, in epidemiologe na zahtevo - mleko, sladoled, izpiranju različnih predmetov Take sterilno brisov materiala, ki sestoji iz hlebec iz vate, navija na koncu lesene palice ali kovinske palice (igrače, itd.). V prisotnosti močno opredeljenih diphtheritic filmov naj bi drgnite prizadeto območje s palčko, da bi dobili določeno količino izločka. Material vzeta iz nosu v istem palčko, nekateri pa minimalno število rane volne na njej. Da bi prevzeli gradivo, je treba sprejeti v prvi bris nosno prehod. Pri sprejemanju materiala iz
NOCA potrebno, da se nosnici stranišče (pranje s fiziološko raztopino ali alkohola) in kožo na nosu ne dotikajte.
Vzeto material se nahaja v epruvete in takoj pošlje v laboratorij. Če za traja več kot 3-4 ure, z uporabo tamponov navlažimo z raztopino 5% glicerola v 0,85% fiziološki raztopini soli. Tamponi je treba zaščititi pred delovanjem sonca, zamrzovanje in sušenje. Večinoma inokulacijo (20-50%), davica bacili od bolnikov davičnih povzročajo najpogosteje ob napačnega materiala in čas trajanja od dneva njene prevzemu setev.
V laboratoriju, nadaljujte z bakteriološko preiskavo. Tamponi so uvedli v cev iz zloženega konjskega seruma in nato drgnjenje površine vsebine v serumu, medtem ko proizvodnjo rotacijskega gibanja. Hkrati bo pridelek na skodelico agar telluritovym krvi, v sredo ali sredo Clauberg Tinsdalya za pridobivanje čiste kulture davico bacilov. Za diagnostične namene, vsebina neposrednega mikroskopskega študije na blazinico trenutno izvaja redko, včasih pa tudi v nujnih primerih na zahtevo zdravnika, ki uporabljajo to upravičeno. Potem ko sadilnega materiala, da madežev za obarvanje modro in Neisseria.
Zasejali material, pridelan na 37 ° in preučila 18-24 ur kasneje. To se lahko uporablja za izvedbo študije, na primer 6-12 ur v nujnih primerih. Od goji kulturo pripravili razmaže in obarvali s Gram, alkalne metilen modro in Neisser in mikroskopiruyut. Včasih je zaviralo rast mikrobov. V teh primerih je potrebno pustiti pridelka, za en dan in to ponovite mikroskopske preiskave. Prisotnost mikroorganizmov, ki imajo davice značilno oblikoslovni in tinctorial lastnosti, se lahko šteje kot pozitivni.
Postopek, ki omogoča izbiro davice bacillus hitreje je, da tampon vlažne sterilno serum, ki se kotalijo blazinico s segrevanjem do 80 °. Serum Bris obriše prizadeto mesto (žrelo, mandeljnov) in damo v termostatu pri 37 °.

Video: Watch Video ograje biomateriala - dnks.ru

Lastnosti davica bacili in blizu je diphtheroids

Madeži pripravljen iz 3,4-urne kulture na blazinico, je mogoče zaznati precejšnje število bakterij.
Dobri rezultati so doseženi tako, da material ne suho palčko, blazinico namočeno Pred uporabo 2% kalijevega tellurite. To daje vedno veliko cepljenje proti davici bacilov. Pri uporabi telluritovym rasti bris davice bacile v okolju Leffler pojavi najkasneje 18-24 ur.
Pri ugotavljanju čiste kulture davici bacilov in odmika Hoffmann psevdodifteriynoy palice in diphtheroids določi po osnovnih lastnosti (tabela. 20).
Pri dodeljevanju nontoxigenic kulture brez sladkorji vsebuje dodatne vzorce za odkrivanje ureaze encima (sečnina cepilnim) in tsistinazy (Pisa sondo).
Za določanje encimske ureaze (Zaks vzorec) ekstrahiramo gojitvena brozga smo inokulirali v sečnine in indikatorja krezolrotom. Rdečica medij opazili v 20 minutah kaže prisotnost ureaze encima, ki ni značilna za prave difteričnim palic. Prisotnost encima tsistinazy zazna setev v koloni medija kulture s cistina in svinčevega acetata, je obvezno za difteričnim palice. Pod vplivom cistin tsistinazy in cepimo z reakcijo z svinčevega acetata, svinčevega sulfida, ki obarva medij med injiciranjem v črno-rjave barve.
Za končno diferenciacija davice palice iz drugih članov skupine, ki jo korineformne objavljen mikroskopske preskus aglutinacijskim na steklu z polivalentne serum proti davici sledi: aglutinskim serum razredčen s fiziološko raztopino v razmerju 1: 25. Slana raztopina se pripravi na naslednji način. V 100 g destilirane vode raztopimo 3 g natrijevega klorida, prilagoditi pH 7,6, dodajanje 5% raztopino Na2HP04 in steriliziran z teče pare v treh izvodih. Izoliran kultura speremo z isto raztopino kuhinjske soli, sterilnega Pasteur pipeto in nanesemo na kapljico polivalentne seruma. Nadzor aglutinacijo serum in fiziološko raztopino. Ko pozitiven odziv v 2-3 minutah aglutinira pojavljajo kosmičev.
Aglutinacije reakcijo lahko dostavijo s standardno difterijskim serumov I, II, III, IV in VI serotipov.
Če je izbrana kultura dovolj značilno, nato pa, da se razlikuje od diphtheroids strupenosti opredelitev te kulture, ki jih okužili živali. Ugotovite je toksičnost namenjen kultura davici bacilom potrebno, in v primerih, ko ta mikrob izoliranih iz zdravih nosilcev in rekonvalescente Šentvid pri Stični ali iz krajev, kot so površine rane, genitalije, ušesa, oči, itd virusi okužijo morski prašički na dva načina - .. Intradermalno in podkožna . Po izkušnjah pokazal dva prašičev, od katerih je eno (kontrola) upravlja dan pred antitoxic davici seruma v količini 500-1000 AE-drugem prašiča (eksperimentalen) v serumu ni bil uporabljen. Na dan poskusa obeh nasprotnih prašičev smo dajali testno kulture v količini 0,2 ml na standardni 50-100-200 milijonov. Mikrob v 1 ml. Z uvedbo dnevnega kulture pod kožo morskega prašička je razvila naslednje pojave. Na mestu vnosa v nekaj urah infiltrat testovatoy konsistenco, ki ob koncu 1-bitov ali 2 dni doseže kar precej velika. Žival postane zaspan, slabo in noče jesti. Smrt nastopi skozi različna obdobja (1-5 dni ali več), odvisno od kulture in toksičnost odmerka. Pri odpiranju dajanje na kraju samem, je serozni ali serosanguineous infiltracija, v kateri se je dalo čisto številni praskami difteričnim bakterii- krvi in ​​organov ostane sterilen. Obdukcija iz drugih pojavov, značilnih za povečanje in najbolj hiperemija nadledvično žlezo in serozni izcedek v plevralni votlini in v osrčnika. Organi so nekrotične področja, ki jih levkocitov, mišic in živčnega tkiva prežete - degenerativne spremembe. Ko intradermalno uporabo na mestu kulture je vnetna reakcija in nekroze. V nadzoru prašiči niso opazili nobene reakcije na obeh načinih upravljanja kulture. Vnutrikozhiy Postopek omogoča eno prašiča za preizkušanje več sevov davici bacilov.
Strupenosti davice bacili se lahko določi v drugo, preprostejšo metodo. Petrijevki Geidenreich zlijemo v 12 ml stalimo in ohladimo na 50 ° 2% mesno-peptonski agar ali 2% agarja kurišča juhe, ki smo mu dodali 0,3 mg cistina in 15-30% normalne konjskega seruma. Dobro premešamo in pustimo, agar, da se strdi. Nato v sredini čaše nameščen trak filtrskega papirja in steriliziramo v avtoklavu navlaženo davice razstrupljanju seruma, ki vsebuje v 1 ml 500 AE. Jed osušimo v peči za 15-20 minut, nato inokulirali s kulturo pod študijskih kapi pravokotno na filter iz papirja ali plakov s premerom 1 cm na razdalji 0,5 cm od papirja. Ena skodelica lahko sejejo 3-4 kulture (eno kontrolo - strupenih).

Sl. 86. Oborino izobraževanje - flokulirajo ( "Boom - brki") kot posledica medsebojnega vpliva toksin davice, davici bacilov s antitoxic seruma.
Sejanje vsake kulture proizvajajo plake ali štiri vrstice (dva na vsaki strani).
Pridelki so nameščene v inkubator. Računovodski proizvajajo 24, 48 in 72 ur.
Določitev toksičnost temelji na naslednjem načelu: toksin proizvedena v procesu rasti davici Bacillus, difundira v gojitvenem mediju kot posebno seruma iz filtrskega papirja. Srečanje toksin in antitoksin skupaj s tvorbo precipitata linij - flokulirajo v obliki "anten" ali "puščice" med kapi pridelkov. Lahko se zelo jasno vidi z upoštevanjem skodelico na temnem ozadju s povečevalnim steklom. Strupenih sevi linije konvergirajo na obodu med seboj, in če ima toksigenske nadzora rasti so priključena na obori tega seva. Toksigene flokulacijo (nadzor) in nontoxigenic sev ne konvergirajo, in prečkala (sl. 86).
V primeru odkritja morfološko tipičnih davici palice odgovori: "Zaznana davice bacillus." V odgovor na diagnostičnih testov, če je rast davica bacili, navede, kateri drugi mikroorganizmi obnaruzheny- odgovor na bacteriocarrier ne morejo praznovati.
Primer.
ANALIZA № 1
Sluz iz grla bolnikov Nina Ivanova davici.
zazna bakteriološka preiskava sluz iz grla davico Bacillus. Prejeto rast gram pozitivne streptokoki.
Laboratorij (podpis)
Posebni preprečevanje in zdravljenje. Aktivna imunizacija otrok z namenom preprečevanja se opravi z uvedbo tetanusa. Trenutno v širokem medicine vključena kombinacijo zdravil: davico, oslovski kašelj, davica-koklyushnostolbnyachnaya cepiva (DTP).
V nekaterih primerih, za preprečevanje davice pri otrocih, ki so v stiku z bolniki, je treba izvesti pasivno imunizacijo z vbrizganjem antitoxic davice seruma.
Z namenom zdravljenja je bila intramuskularno bolnik ali subkutano davici seruma. Odmerek je odvisen od bolnikove starosti in resnosti bolezni. Njegovo delovanje je bolj učinkovito, prej ga je predstavil. Antitoxic serum nima baktericidno in zdravljenje bolnika lahko ostane bacillicarriers in lahko okužijo druge.
acido-bacili
Skupina acido-bacilov so povzročitelj tuberkuloze (Mycobacterium tuberculosis) in povzročitelj gobavosti (Mycobacterium leprae). Rod Mycobacterium nanaša tudi število saprofitskih bakterij, ki se pojavljajo v tleh, vodi, mleko, maslo in na človeško kožo (v ločene prepucialnih krat-M. Smegmatis). Za nekatere lastnosti (tvorbo razvejanih oblik in upočasniti rast nekaterih mikobakterij v hranilnem gojišču) mikobakterije podoben gobe, kar pojasnjuje ime skupine (mycos - gob). Bakterije te skupine je postala znana kot kislinsko odporne, ker so jasno izraženo odpornost na mineralnimi kislinami: 5-10% raztopine žveplove in klorovodikove kisline, so shranjeni za dolgo časa. Poleg tega sprejema eno ali drugo barvo (npr magenta CARBOLINE), ne razbarvajo raztopine mineralnih kislin. Poleg odpornosti proti kisline, alkalijske odporni mikroorganizmi, to skupino in alkohola.
Kislinsko-patogenih saprofitov razlikujejo od tistih, ki niso zahtevna hranilnem mediju in raste v širokem temperaturnem območju.