Brucella - mikrobiologija s tehniko mikrobioloških testov

Sl. 94. Brucella v čisti kulturi.
Barvanje Brucella Kozlovsky. Fiksni vzorce smo obarvali z 2% vodno ogreva safroninom (dokler mehurčki), ohladili, sprali z vodo in dokrashivaetsya 0,75-1% vodne raztopine malahitzelene nad 17a-2 minutes- Brucella ohranijo safronina rdeča in ostalih bakterij in mobilnih elementov pobarvane v zeleno.
Kulturne in biokemične lastnosti. Brucella dobro uspevajo na skupnih medijih hranil v aerobnih pogojih. Vendar splava patogen korov- »Br. ABq ^ tus bovis izraženo mikroaerofilnih lastnosti: Prva generacija tega mikroba večkrat izključno v atmosferi, ki vsebuje 5-10% ogljikovega dioksida, in le kasnejše subkulture dajejo dobre rasti pri normalnih pogojih.
Na agar plošče rast manjša kot rosa, okrogle izbočene kolonije, postopoma povečuje do 2-3 mm v premeru. Te kolonije imajo običajno gladko strukturo (S-oblike) niso jasne, z belkasto bisernega sijaja. Postopek disociacija pojavi grobo obliko (R-oblika), ki se razlikujejo od S-tvorijo številne funkcije (tabela. 22). Nagib rastejo majhne izolirane kolonije, ki kasneje združili, da se tvori sivo-bele barve, prosojno prevleko. Gojenje na agarju s 5% glicerola ali jetrne gojišča izboljša Brucella.

Brucella

V Brucella brozgi zagotavljajo celovito motnost s posledično tvorbo sluzi usedline na dnu, ne utekočini želatino, mleka ne Zgrušati, ne razgradi ogljikove hidrate. Fermentirani proteinov, da se tvori amoniak in vodikov sulfid, zmanjšanje nitratov, ki nitritov.
Antigensko strukturo. Brucella imajo dve skupni somatskih antigeni A in M, tako da pripraviti posebno črto med njima z aglutinacijo reakcija ne uspe. Odvisno od vrste Brucella obeh antigenov, ki se nahajajo v celicah v različnih razmerjih. Torej, Br. melitensis antigena M prevladuje, medtem Br. abortus bovis in Br. abortus suis- antigen A. Nedavno Brucella antigena dalo vi-.
Odpornost. Ko izpostavljeni temperaturi 60 ° Brucella umre v nekaj urah. 1% raztopina karbonskega kisline jih uniči 15 minut. Posušeno urina, lahko traja do 22 dni.
Patogenost pri živalih in toksinov. Z Brucella občutljivi morski prašički, belih miši, podgane in kunce. V naravnih pogojih, bruceloza najdemo v koz, ovac, prašičev in krav.

Exotoxin Brucella ne tvorijo. Strupene mikrobnih celic nanaša endotoksinov.
Patogeneza in ambulanta. Vir okužbe z brucelozo, je velik in predvsem drobnice (koze in ovce) in prašičev. Humani okužbe pojavi z neposrednim stikom z okuženega materiala (pogosto pri skrbi za živali) ali kot posledica porabe mleka, mlečnih izdelkov in mesa okuženih živali, če se ti proizvodi niso podvrženi toplotno kuhanje.
Obstajajo številni primeri okužbe s pomočjo svežega kozjega sira - sir.
Atrij je prebavila, kože in sluznic. Na mestu vhod vrat brucelo je ne povzročajo vnetja in prodrejo v regionalnih bezgavkah, ki so neverjetno. V teh vozlišč brucelo razmnožujejo močno, nato pa je rezultat "preboj" regionalne limfne pregrado s hematogenim razširi po celem telesu, ki povzroča posploševanje primarno okužbo. krvni tok Brucella so zapisani v notranjem opgany (vranica, bezgavke, kostni mozeg, itd), Če metastatskega žarišča oblikovana. V preteklosti eksacerbacijo procesnih ponovno pojavi množenje Brucella, ki je enkrat v krvi, so odgovorni za recidivov splošnih okužbe. Inkubacijska doba traja od 7 do 21 dni. Bolezen postopoma razvija. Tipičen manifestacija okužbe je valovita vročina: krivulja temperature ima valovit (valovito) značaj. Bruceloza pojavlja kot kronično ponavljajočimi se okužbami z zelo raznoliko klinično sliko (poškodbe živcev, sklepov, kosti, pljuča, oči, jeter, vranice in drugih organov). Nosečnice lahko pride do splava. Obstajajo netipične, blage oblike bruceloze, ki dajejo le rahlo povečanje temperature.
Bolezen lahko traja od nekaj mesecev do nekaj let in se konča z samozdravljenja - okrevanja (PF Zdrodovsky).
Iz telesa bolnikov z Brucella izločajo v urinu, in doječe ženske tudi z mlekom.

Imuniteta. Odloži bolezen zapusti papež sam relativno imunost. V krvi bolnikov Zaznali aglutinini, pretsipitiny in komplechent vezavnih protiteles. Že zgodaj v bolezni, v akutni fazi začne imunološko spreminja telesa, kar ima za posledico akutno proces postane kronična, nato latentnem stanju in končno pride do samozdravljenje.
V immunogenesis z bruceloze vlogo ne le humoralni dejavnikov, vendar, kot je razvidno iz eksperimentov PA Vershilovoy živali, povečali funkcijo pregrade bezgavkah. Ugotovljeno je bilo tudi, da ko se zgodi izboljšava bruceloza fagocitozo, ki jo zazna uprizarjanjem opsono-fagocitna reakcijo.
Bruceloze v človeškem in živalskem organizmu spremljajo alergijske preureditev, ki se izraža v povečanju občutljivosti povzročiteljev okužbe z brucelo in njihovih toksinov Zato za diagnozo bruceloze uporablja preskus alergija Burne.
Mikrobiološka diagnoza. Bruceloza je še posebej nevarne okužbe, in zato bakteriološki diagnozo se lahko izvede le v specializiranih ustanovah.
Material za laboratorijske študije lahko kri, pikčasti prsnice mozga, urin, mleko (odkrivanje patogenov) in seruma pacientov (za detekcijo protiteles).
Metoda krvi kultura omogoča identifikacijo Brucella iz prvih dneh bolezni. Kri se pridobiva z vene smo inokulirali v 10 ml stekleničkah dveh 100-200 ml mesno peptonski bujon ali jetra. Najboljše rezultate dobimo pri dodajanju k brozgi z 1% glukoze in 2% glicerola.

Br rasti. abortus bovis morali ustvariti povečano koncentracijo ogljikovega dioksida. To se dosega s preprostim. Bombažna zapiralni čep bučko osvetljen in potisne v vrat globine, ki jo nato hermetično zaprto na vrhu z gumijastim zamaškom.
Nacepljene bučke (ena z rednim juho, in druge visoke koncentracije ogljikovega dioksida) damo v termostatu pri 37 °, po 7-8 dni ali več kasneje pride rasti Brucella, pogosto v obliki majhnih kolonij tyazhah vgrajenih v fibrin. Broth pa rahlo motna ali prozoren. V prisotnosti rastnega brozge proizvaja setev skodelico z agar jeter agarja in hranilnem agarju D. Suho inokulacijo Brucella D povečuje in je sestavljen iz juhe hranil, kvasa avtolizata in natrijevega klorida. Ker imajo Brucella v prvo generacijo počasno rast, morajo rastline, inkubiramo vsaj en mesec vsakih 5-7 dni in se skodelico cepitvijo agar jeter. Iz kolonije otvivayut čiste kulture, katerih identifikacija je končan aglutinacijo z Brucella antiseruma. Ko upošteva diferenciacijo Brucella vrst odnosa
Tabela 23

Simboli: + za rast ali evolucije serovodoroda- - ni za javnost rasti ali odsotnost emisij vodikovega sulfida.
prva generacija kultura v ogljikov dioksid, njihova sposobnost za proizvodnjo vodikovega sulfida in rast agar jetrna na trdnih medijih, na katerega sta dodali nekaj anilin barvila pri določenih koncentracijah (tabela. 23).
Za izolacijo mielokultury pikčasti kostnega mozga sprejela brizgo prsnice, kakor tudi pregledati kri na krvnih kultur. Mielokultura sprosti v 1 / 2-2-krat pogosteje kot kulture v krvi. Za urinokultury vzeti urin je kateter aseptično centrifugiramo. Oborino smo posejali v agar ploščah, ki se ji doda encijan vijoličast v razredčenju 1: 200 000 za inhibicijo rasti grampozitivnih flore.
Brucella inokulacijo največje možno dobiti pridelke s testnega materiala v rumenjak iz svežih ali hranilni mešiček v piščančjih zarodkov. Kri razredčimo v razmerju 1: 3 in citratnega brozge v količini 0,1-0,2 ml dajemo v več jajc. (Tehnika jajca okužene opisano v poglavju "Virusi" str. 385.) preskuša okuženem jajc damo v termostat za 5 dni pri 37 °, čemur sledi 0,3 ali 0,5 ml vsebine jajc, inokuliranih na trdnih in tekočih hranilnem gojišču, poljščine vsak 2-3 dni.
Velika diagnostični pomen je serološka diagnostika - aglutinacije Wright.
Reakcija Wright. Ta reakcija je specifična. To se kaže v prvih dneh bolezni, in jih je mogoče shraniti za dlje časa, ki ga izginotje simptomov bruceloze.
Wright Reakcijsko zmes čaka na podlagi postopka bruceloza Widalovega reakcije. Ker je bil antigen, za uporabo Reakcijsko mešanico ubili Brucella vsebuje 1 milijard. Bakterijski telesa v 1 ml tega diagnostičnega kompleta, ki vsebuje 10 milijard. Mikrobski telesa, razredčimo 1:10 pred uporabo. Reakcija je vedno dal Wright z dvema nadzora.

1. Nadzorovanje serum predstavljajo z vsakega preiskovanega seruma.
2. kontrolni antigen, je v epruveto za poljubno število serumov testirane.

Cevi so postavljeni na 4 ure termostatu pri 37 °, nakar se prvi sekundarni uchet- obračunavanje izvedli po 18-20 urah stoji pri sobni temperaturi. Pozitivna reakcija na titer 1: 50 se šteje, da je dvomljivo, pri titer 1: 100 - rahlo pozitiven pri titer 1200 in 1400 - pozitivno in se titer 1800 in nad - zelo pozitivne.
Reakcija Heddlson dobro Kaytmazovoy. Postopek Rapid serodiagnosis predlagana leta 1926 Heddlson. Sprememba Heddlsona ni imel široko uporabo tako dolgo, kot EI Kaytmazova ni izboljšalo in racionalizirati. Za proizvodnjo reakcijske-Heddlsona Kaytmazovoy bili potrebni naslednje sestavine: 1) pacientovo seruma, 2) s soljo, 3) diagnosticum (barve). Bistvo tega enostavno in zelo občutljivo aglutinacije reakcije je naslednja (tabela. 24).
Tabela 24 Shema Heddlsona Reakcijsko - Kaytmazovoy

Redni stekla (velikost 20X15 cm) rascherchivayut v šest kvadratov. V prvih petih kvadratov mikropipeto serumu pacientov nanesemo v količini 0,08- 0.04- 0.02- 0.01- 0.02 mL, šesta - 0,03 ml diagnosticum. V prvih štirih kvadratov dodamo 0,03 ml diagnosticum, peti in šesti - 0,03 ml fiziološke raztopine. Vsi kapljic rahlo mešamo s stekleno paličico v smeri od večje do manjše razredčitvi, nato pa se steklo segrevamo nekoliko nad plamenom plinskega gorilnika 3 minute. V primeru pozitivnih učinkov pojavljajo prepoznavna kosmičev (aglutinacije). Trajanje opazovanja od 5 do 8 minut. Za diagnozo bruceloze uporablja tudi fiksacijo komplementa, dajejo opsodo-fagocitne vzorec.
Test Alergija Burne. Za diagnozo, od 8-10 th dan bolezni, ki se uporablja za intradermalni test na alergije po Burne. Uporaba antigenov brucelin (ali Melitina) - sterilno filtrat iz 3-4 tednov starih kultur Brucella brozge. S pozitivno reakcijo prikaže naslednji dan ob brucelin mestu injiciranja (0.1 ml, uporabljen intracutaneously v osrednjem delu fleksornega površine podlakti) boleč eritem in otekanje 4-6 cm v velikosti (sl. 95 insert).

Sl. 95. Burne alergijski testi (pozitiven).