Griža bakterije - mikrobiologija s tehniko mikrobioloških testov

BAKTERIJE griže (Shigella)
Grižo - nalezljiva bolezen označena z lezij kolona in pojavov zastrupitve. Povzročitelj te bolezni je skupina bakterij, ki jih skupno generičnim imenom združeni - Shigella v čast japonskega mikrobiologa Shiga, ki je izkazal vlogo teh bakterij v etiologiji griže.
Obstajata dve vrsti griže bolezni: 1) amoebic griže povzroča driske Amoeba in se pojavlja predvsem v toplih državah, in 2) bacillary griže povzroča dysenteric bakterije in razširjena.
Palica griže najprej izoliramo v čisti kulturi AV Grigoriev leta 1891. Šele kasneje so bile ločene vrste in vrste dizenterije palice.
Leta 1962 je bil sprejet sovjetski razvrstitev bakterijske griže (Shigella), ki temelji na antigenske in biokemičnih lastnosti neločljivo Glavni predstavniki te skupine mikroorganizmov so bili dani.
Po tej klasifikaciji (. Tabela 16), Shigella razdelimo v dve skupini:
1) nonfermentative manitol (mannitotritsatelnye) in 2) fermentiranje manitol (mannitpolozhitelnye).
Prva skupina vsebuje tri vrste bakterij: Grigoriev-Shiga-opremljanje in Schmitz Lardzh-Sachs da antigenski strukturi razdeljen v 8 vrst, drugi - dve vrsti: bakterije in Flexner sonnei. Poglej Flexner v svojih encimskih in seroloških lastnostih, razdeljen na tri podvrste: dejanski Flexner, Nyukestl in Boyd.
Antigenske strukture podvrste Flexner razdelimo v 5 serološke variant in podvrste Boyd - 15. Bakterija Nyukestl brez serološke vrste biokemijski lastnosti so razdeljene v tri podtipe (glej tabelo 18 ..). Bakterije Sonne serološke variante nimajo, ampak so nagnjeni k disociacije na trdnih medijih hranil. V procesu disociacije oblikovali gladke in grobe kolonije.

Domače razvrstitev dysenteric bakterij (rod Shigella)

1. Ni jasno, kaj sodi vrsta,
2. Brez značilnih antigenov.
3. Tri vrste encimska.

Sl. 80.

Gladka kolonija (S-oblike) so majhne, ​​prozorna, brezbarvna z gladkimi robovi (slika 80). - kolonija grobo (R-oblika) - večja, ravno, neobdelan z nazobčanimi robovi, manj pregledni kot gladke kolonije.                                                   
Morfologija in tinctorial lastnosti. Griža bacillus po velikosti, obliki in obarvanje podobno celotne skupine tifusu. Za razliko od slednjih, še vedno.
Kulturne in biokemične lastnosti. Griža bacillus rastejo na rednem medijih hranil, kot so tifus bakterij. Na mediju z ogljikovimi hidrati imajo nižjo encimsko aktivnost v primerjavi z drugimi člani enteralne trebušnim skupine z rastjo brozgi ne tvorijo vodikovega sulfida.
Dysenteric bakterije ne fermentira laktoze, druge ogljikove hidrate razgradijo šele v kislino. Palice Sonne povzroči nastanek počasno in šibko kislino v mediju z laktozo (drugi dan).
Za razlikovanje griže palice iz tifusu podobna paratifus in med seboj se uporabijo: 1) razmerje ogljikovih hidratov, 2) za študij mobilnosti, 3) aglutinacije reakcijske. Podobnosti in razlike znaki dysenteric bakterije prikazano v tabeli. 17 in 18.
Tabela 17: Biokemijske lastnosti bakterijske griže (Shigella)

Biokemični možnosti podvrsta Nyukestl1
Legenda: + fermentira, da nastane kislina ± fermentira ne always-- ni fermentiran.
Tabela 18

Legenda: K - se fermentira, da se tvori kisline, CG - kislino fermentirani da se tvori sloj plinskega materiala in oznake v oklepajih pomenijo zapoznele reakcije se opazovanje izvaja 15 dni pri 37 °.

Odpornost. Odpornost na različnih griže palice ni isto. Na primer, Shiga bacil Grigoreva- direktno sončno svetlobo ubili v 30 minutah, in bakterije in Flexner sonnei - 3 na uro. V tleh Grigoriev-Šiga bacillus shranili v povprečju 45 dni, in Flexner in Sonne - 65 dni. V ledeni griža bacillus shranijo več tednov ali mesecev. Segrevanje na 60 ° jih ubije 10 minut. Fenol in belilo v običajnih koncentracijah dysenteric bakterije ubije v 30 minutah.
Patogenost pri živalih in toksinov. V naravnih pogojih, živali niso dovzetne za bolezni in bakterijske driske. Umetna okužba skozi usta še ni dokončen. Dizenterije bakterije Grigoriev-Shiga proizvodnjo eksotoksin. Eksotoksin precej odporni glede na visoke temperature in prenese segrevanje na 70 °. Druge vrste griže palice so manj strupeni in oddajajo samo endotoksinom.
Patogeneza in ambulanta. Vir okužbe z grižo je bolna oseba, rekonvalescente Šentvid pri Stični in bacillicarriers. Okužba grižo pojavi ob stiku-gospodinjstvu ali preko okužene hrane in vode. Griža mikrobi vstopijo v telo skozi usta in lokalizirane v debelo črevo sluznico in povzročajo tukaj prvič akutno prehladnih in nato diphtheritic vnetje. Nato nekrotične Postopek razvija, kar ima za posledico tvorbo razjede. Inkubacijska doba je kratka z grižo - od 2 do 5 dni. Značilni simptomi: utrujenost, bruhanje, povišana telesna temperatura, letargija, tekočina, sluz na začetku in potem madeži blato, pogosto blato, do 40-krat na dan, spremljajo hude bolečine. Zelo značilno boleče tenezem - imajo pozivam, da blato.
Strupene in hude oblike griže s Shiga palice Grigorieva povzročene, in nekatere vrste bakterij prilegajoči Schmitz. Trenutno je najbolj pogosta oblika grižo s palicami Flexner in Sonne povzročil.
Imuniteta. V griže imunosti šibko izražen, čeprav v krvi pacientov kažejo različne protitelesa (aglutinini, bactericidin, opsonins, komplementa protitelesa in antitoxins - grižo z Shiga-stick Grigoriev in strupenih oblik dizenterije opremljanje povzročajo - Schmitz).
To, očitno, pojasnjuje možnost prehoda akutnih oblik kronične driske. Pomanjkanje navzkrižne imunosti (pred vsako bakterijske protiteles vrste specifičnih tvorjenih only) omogoča, da se ponovi griže bolezen, če se pojavi infekcija stališča.
Mikrobiološka diagnoza. Za študije o griže morajo uporabljati sveže blato, lahko samo dobimo od pacienta, sicer je odstotek pozitivnih rezultatov bistveno zmanjša.
Za zbiranje blata je priporočljivo uporabiti sterilno krožnikov in prtičkov, ki se dajo v posodo, speremo z vročo vodo (plovilo za predelavo ali raztopina lonec razkužila ni dovoljeno, saj majhnimi količinami zadnje ubijanja griže bacillus). Med transportom na dolge razdalje blata zbranih blato damo v široko cev tekočine za shranjevanje (30% nevtralnega glicerola in 70% raztopine) v količini od 13 do 23 blatom (10,5 ml) v to zmes. Cevi je treba hraniti v temnem prostoru pri nizki temperaturi. Setev iztrebki morajo biti najkasneje 12-24 ur, je po zaužitju.
To lahko služi kot konzervans 1,5-3% hipertonično fiziološko raztopino in prejeli nedavno razširjena med akumulacijo Leyfsona. Sestavek tega medija je vključen selenistokisly natrij, ki stimulira rast bakterijske griže, medtem ko preprečujemo hkratno razvoj mikroflore (E. coli, stafilokokov, enterokoki in drugih mikrobov).
Priprava selenitovoy Leyfsona okolje. V 1 liter destilirane vode raztopimo 7 g brezvodnega dinatrijevega hidrogen fosfata, 3 g monobazičnega natrijevega fosfata (NaHP04), 5 g peptona (češkoslovaška družba "SPOFA" ali madžarščina «Richter"), 4 g laktoze, polnimo v vialah po 50 ml in steriliziran tekoče pare za dva dni do 30 m pri temperaturi 112 ° C za 30 minut.
Ločeno pripravimo v sterilni vodi, raztopino 10% natrijevega selenitokislogo kisline (NaHSeCb). Pred uporabo je vsaka viala vsebuje 50 ml osnovne raztopine dodamo 2 ml raztopine natrijevega selenistokislogo in kuhano Medij smo porazdelili v sterilne epruvete v 5-7 ml n tesno zamašimo,
Pred pripravo okolje za uporabo, je treba natančno določiti delež fosfata, ki z peptona preskusnega vzorca in kislega natrijevega selenistokislogo daje pH ni večji od 6.9-7.1, ki jo krmili s spreminjanjem količinskem razmerju fosfatov.
Takšne podtitrovka je pri vsaki menjavi eno serijo srednje sestavin (peptona, selenistokisly kisle natrijeve fosfati).
Material Zajemanje se lahko izvede s pomočjo steklene epruvete s opayannymi konci ali z bombažno krpico.
Platinum zanko ujeli sluznice ali mucopurulent cmok, ki se ponovno sprati, v sterilni fiziološki raztopini in cepljen v tri skodelice zaporedno s srednje Bacto agar ali Levine J.
Po 24 urah gojenja v inkubator setev raziskovanje nežne krožne prozornega brezbarvnega kolonije. Sumljive kolonije so pregledani na poševno na manitola in kratke pisane številko s laktoze in glukoze, in 24 ur kasneje upoštevati dosežene rezultate.
Hkrati z materialom brezbarvnih kolonij objavljen približno aglutinacijo s vrstah in po potrebi monoretseptornymi tipično serumi. Pozitivna reakcija z enim od serumov potrjuje mikroba, ki spada v skupino griže. Rezultat študije (pre) lahko izda tudi po 24 ur.
Namesto kratkega niza sivi lahko uporabite okolje Russell je. To okolje je priročno, saj nadomešča tri cevi. Namesto tega je poševno posnet medij površini Russell je (s svojimi drogira, okvirni aglutinacije). Ko je fermentacija laktoze in kolona medija in poševna ploskev obarvali indikatoru- vsakokrat med fermentacijo glukoze srednje kolone samo obarvajo ustrezno zmanjšano barve indikatorja in plin nabira na dnu in v obliki mehurčkov zlomi agarja. Glukoza v Splitu medij Russell je le v anaerobnih pogojih. Kultura, fermentirati laktozo na okolje Russell je v prvi dan, se šteje nepatogene in daje negativen test. Enako kultura, ki fermentira glukozo le proti kislini, so za nadaljnjo raziskavo. Pripravite zdravilo za barvanje po Gramu, in ugotavlja gibanje in daje preizkus aglutinacijskim na steklu. Priporočljivo je, da uporabite mešanico serumov proti prevladujejo v tem območju in vrste Shigella vrst (npr Flexner, Sonne, Nyukestla). S pozitivnim rezultatom, kultura seštejeta polivalentno proti Flexner seruma, serumu in serumskega Nyukestla Sonne,
Za določitev vrste in podvrste izbran flexneri kulture, je bila testirana v reakciji aglutinacije na steklo najprej s standardnim serumov (I, II, III, IV in V), nato pa s skupino (3, 4, 6, 7 in 8). Za se dokončna identifikacija izoliranega medija kulture zasejali v sikanje manitola, maltoze in saharoze v epruveti z brozge Hottinger za določanje vodikovega sulfida in indola.
Osnova naslednjih simptomov služi za razdeljevanje pozitiven test: gram negativno selekcijo, značilne fiksne coli s kulturo in antigenske značilnostmi Shigella.
Nekateri bolniki z atipičnimi stoječih palice, ki niso tipsko specifičnih seruma sprijete. V takih primerih je mikrob, ki spada v skupino griže set vzorca na izbrani lizo z bakteriofagom kulture dezinteriynym polivalentne bakteriofaga.
Odkrivanje bakterij grižo s povečanjem faga titer. V blato brez konzervansa smo stehtali in nanj mesa peptonski brozge (pH 6,8-7,0) hitrostjo 10 ml na 1 g blata ploščo, stresamo z biseri, poravnani 5-10 minut. Nastalo suspenzijo smo vlili v 2 širokih cevi z 9 ml v vsako. Kazalec ml fag 1. 1 (za detekcijo bakterije griže) razredčimo v razmerju 1: 100 v 2. - 1 ml juhe. Tretji cev 9 zlijemo ml brozge in 1 ml sledila v delovnih razredčitev faga. Od treh cevi 1-I je izkušen, 2. služi kot nadzor za prisotnost prostega fag, tretji - nadzor kazalca fag titer. Epruvete damo v termostatu pri 37 ° C za 4,5-5 uri za povečanje faga. Vsebino vsake epruvete razredčimo v brozgi 500-1000 ali večkrat, da 1 ml tretje cevi (kontrola faga), da dobimo takšno količino negativnih fagnih kolonije, ki se lahko upoštevajo (10-20 krvnih celic). Epruvete segrevamo za inaktivacijo mikrobov v vodni kopeli pri 56-58 ° C 30 minut. Nato je uporabljena metoda agar plasti, ki omogoča, da se določi količino krvnih celic grižo bakteriofaga. Ta metoda je, kot sledi. Tri skodelice Geidenreich - Petrijeve vlijemo 1,5% mesni pepton agar dobro posušimo in nato zlijemo v drugega sloja,
ki sestoji iz 2,5 ml staljenega 0,7% agar, 0,1 ml splakovanje referenčnih kulture dysenteric bakterij in segrevali mešanico 1 ml cevi 1, 2, 3-d (v vsaki skodelici zmesi). Po 20-30 minutah smo skodelico damo v termostatu pri 47G 5 ur in nato upoštevati rezultate reakcijskih lise v sterilni posodi s testnega materiala (I-1 cup) in kontrolo (2. in 3.).
Povečana titer Bakteriofag (fag krvne celice) več kot 5-krat v 1. skodelico v primerjavi s kontrolo indicira prisotnost v materialu palice grižo.
Pri kronični griže za diagnosticiranje serum bolezenskega pacientov lahko čaka: 1) opsono-fagocitne reaktsiyu- 2) komplementarno vezno reakcijo, in 3) reakcijo aglutinacije.
Načini formulacije aglutinacije reakcij, ki so analogne oblikovanju Widalovega reakcijo, z edino razliko, da so cevi inkubirali 18-20 ur.
Trenutno diagnoza griže pogosto uporablja reakcijo pasivne hemaglutinacije z eritrocitov diagnosticums Sonne.
Namenska kultura grižo bakterije testirali tudi za občutljivost na antibiotike.
Posebni preprečevanje in zdravljenje.
Neposredni okolici namenjena griže nosilec ali pacientu s kronično dizenterije pri uporabi kot profilaktično sredstvo. bakteriofaga.
sulfa drog (sulgin, ftalazol et al.), antibiotiki (sintomitsina, biomycin, kloramfenikol, streptomicin), ki se uporablja za zdravljenje griže. V primeru hudih toksičnih oblikami bolezni dajemo razstrupljanju protivodizenteriynoe seruma. Pri zdravljenju kronične griže so cepivo alkohol VA Chernohvostova.