Bakteriološke in serološke metode raziskovanja v nalezljivih bolezni

Vzpostavitev etiologiji bolezni omogoča lažje in natančna diagnoza. Laboratorij za raziskave je eden od mnogih objektivnih metod, in ga uporabi za racionalno. Napačna ocena podatkov laboratorijskih raziskav lahko privede do diagnostičnih napak. Tako je negativen rezultat - ni razloga za izključitev domnevno diagnozo. Negativen rezultat je lahko posledica nepravilnega vzorčenje materiala zamude pri dostavi v laboratorij, je nepopolno tehniko bakteriološko preiskavo. Če se material ne sprejme v prvih dneh bolezni, in samo v ozadju vzročno zdravljenje, povzročitelj ni mogoče izterjati zaradi zatiranja njene sposobnosti preživetja ali smrti pod vplivom zdravljenja. Zato je nizek delež bakteriološko potrjena meningokoknih meningoencefalitisu, saj je celo eno injekcijo penicilina ponavadi naredi neuporabna nadaljnje bakteriološko preiskavo. Pozitivni rezultati bakterioloških raziskav lahko odločilno za diagnozo, na primer pri dodeljevanju krvi kulture tifoidni bacillus, paratifus A in B, ko zazna meningokokov, pnevmokoki, palice influence v cerebrospinalni tekočini. Vendar pa je iskanje mikrobov na drugih podlagah ni vedno mogoče natančno določiti diagnozo. Torej, če je davica bacil, meningokoku, Pnevmokoki in bacil gripe izstopajo iz nosnega dela žrela, sluz iz grla in nosu, in Salmonella - iz blata, da bi se lahko drug vzrokov bolezni v teh bakterij prevoznikov mikrobi. Največje težave pri razlagi pozitivnih ugotovitev v raziskavi predstavlja bakteriološko izolacije oportunistične vrste bakterij NVD družine Micrococsaeae in enterobakterij. Zato pri diagnosticiranju bolezni, ki jih oportunistične povzročitelji, je treba previdni, in prihaja iz 4 kriterijih: mnogoterost odkrivanje te vrste je množičnost njihove rasti v kulturah na trdnih hranilnem gojišču, antigenske in fagovarovoy homogenosti dodeljena subkultur in diagnostični povečanje homolognih titri protiteles serološke študije.
Mikrobiološke raziskovalne metode so razdeljene na metode za direktno odkrivanje patogena v telesu pacienta - bacterioscopic in mikrobiološkimi metodami raziskovanja je posredni dokaz prisotnosti patogena v telesu pacienta - serološke študije namenjen odkrivanju specifičnih antigenov v okuženem materialu ali protiteles v serumu in izločki različnih pacienta.
Mikroskopska preiskava krvi, urinu, cerebrospinalni tekočini, sluz iz grla in nosu, blata in različnih patoloških substrati za prisotnost patogena se uporablja za številne nalezljive bolezni. Ta metoda je precej omejeno vlogo, čeprav je to zelo pomembno. Uporablja se predvsem za odkrivanje patogenov v krvi malarije, recidivno vročino, leptospiroza. Likvor raziskovali z tuberkulozne meningitis in gnojni sluz iz grla in nosu - davici, Vincentu angine, kal - z amebiasis, balantidiasis, lyamblioze- urina - z leptospiroze. Palice kuga, antraks je mogoče videti v točkasti kuga Bubo in brisov, vzetih iz antraksa karbunkula- s pikčasto brisa iz kostnega mozga in vranici, lahko granuliranje razjed na voljo v izpljunku leyshmanii- - Mycobacterium tuberculosis. metoda prednost mikroskopija je njegova hitrost. Rezultate analize je mogoče dobiti v nekaj urah. V nekaterih bolezni (malarija, epidemije cerebrospinalni meningitisa, in drugi.) Patogeni lahko zazna, je bolnik že na 1. dan bolezni, kar je zelo pomembno za pravočasno diagnosticiranje in zdravljenje. Zelo razširila priložnosti Bacterioscopic diagnostične pripravke zaradi predelave posebnih serumov, ki vsebuje protitelesa proti danem patogena, označene s fluorokromi (metoda imunofluorescenčni) ali encimov (encimskim imunotestom). Tako označena protitelesa se vežejo na antigen, kot je imunofluorescenco zazna s fluorescenčnim mikroskopom in ELISA - obarvanja produkt encimatske reakcije po dajanju substratom indikatorja zmesi.
Bakteriološko metodo diagnoza temelji na izolacijo patogena iz krvi, cerebrospinalni tekočini, sputum, sluz iz nosu in grla, blatu, urinu, žolču pacientu, medtem smrti - kosov organov, da zasejemo v določenem mediju. Bakteriološke diagnostike se pogosto uporablja za preučevanje sluz iz grla in nosu na difteričnim bakterij, da izoliramo patogene črevesne okužbe (kot so kolera, griže, salmonelozo, ehsherihiozom) iz blata bolnika, pljučnica patogeni - iz izpljunka in v drugih primerih. Hkrati pa upošteva posebnosti domnevne okužbe, dati selektivno lokalizacijo patogena, in način, kako izpustom v okolje. Študija daje pozitivne rezultate v prvih urah ali dneh bolezni. Vendar pa je končni odgovor laboratorij v večini nalezljivih bolezni, o katerih so poročali le v 2-4 dneh, medtem ko bruceloze, tuberkuloze - v 3-4 tednih. To je odvisno od časa, ki je potreben za rast mikroorganizmov in njihovo identifikacijo (biokemijske in serološke). Vsak mikrobov za rast potrebuje ustrezno gojišče. Glede na to, kakšen mikrob Predlagamo izolirati (kot ga kliničnega in epidemiološkega pregleda bolnika določi) izbrana ustreza hranilnega medija. Včasih pridelajo hkrati na več gojišč. Vrednost rezultatov bakteriološkega raziskav je v veliki meri določena pravilno, ali je material, vzet iz pacienta in ali je bilo dostavljeno v laboratoriju desno. Infekciozna material zberemo v sterilnem vsebniku aseptično.
Tabela. 1 prikazuje osnovne podatke o času pokazal material za raziskave in okoljih za primarno inokulacijo.
Material za študij čim prej je treba dostaviti v laboratorij. Če to ni mogoče, je treba hraniti v hladilniku pri +4 ° C, ali dodajanja konzervansov. V nekaterih primerih je treba sejanje je treba opraviti ex tempore (oslovski kašelj, meningokokno okužbo, gonorejo). Po izolaciji in identifikaciji patogenov, običajno določi njihovo občutljivost na antibiotike in druga kemoterapevtska zdravila. To v veliki meri pomaga popraviti terapijo in izbrati učinkovite etiotropic sredstva.
Pri okužbah s oportunistične bakterije, njihovo ločevanje iz substratov običajno niso sterilni (blato, urin, sputum, itd), se ne šteje kot absolutni dokaz etiološko vlogo pri nastanku teh mikroorganizmov bolezni. Kontaminacija endogenega mikroflore pri bolnikih znatno višja od bakterij nosilci. Zato le kvantitativni izračun cepimo mikroorganizmi okužijo živalim sumljiv material (biotest pri miših s pnevmokoknim okužbo).

Tabela 1 Timing ob gradiva v bakterijskih okužb

Serološke študije. Imunska reakcija se pogosto uporablja za diagnosticiranje nalezljivih bolezni pri človeku. razlikovati reakcijo v ki v znanih protiteles določiti neznane antigene in odgovor, namenjene iskanju neznane protitelesa znanih antigenov. Obetavne metode, ki temelji na odkrivanju bolezni v zgodnjem obdobju mikrobnih antigenov na različnih podlagah. To nalogo lahko le delno rešili test vezave komplementa (DGC). Bolj občutljiva metoda je reakcija posredno (pasivno) hemaglutinacije (RIGA) z diagnosticum eritrocitne protiteles, ki se uporablja za diagnozo griže in drugih okužb. Pri tej reakciji se nahaja na tanizirovannyh eritrocit površinsko specifični imunoglobulin veže homologni antigen. Eritrociti ljudi in živali (nativne in formalinized) predhodno obdelamo s taninom pridobivajo povečano sposobnost adsorpcije proteinski snov. Kot adsorbente uporabljenih razen eritrocitov iz lateksa, kolodija, bentonit in drugih. Je lateks aglutinacijski Reakcijsko uporabimo za detekcijo antigenov pnevmokokov palice influence, meningokokov. S pozitivno reakcijo delci lateksa, da se obori. Praktična pomembnost te zelo občutljivo, specifično metodo za določanje bakterijskih antigenov, kot nasprotna imunoelektroforezni (VIEF). V zadnjih letih, za diagnozo različnih okužb je bila uporabljena koagglyutinatsii reakcijo. To reakcijo med antigenom in protitelesom pritrjen na površini S. aureus, ki vsebuje protein A (celične stene komponento večino sevov Staphylococcus aureus). Slednji ima sposobnost priključitev na Fc fragmenta Ig G. Rezultat je immunoabsorbent tipa diagnosticum protitelo, ki reagira s homologno antigenom na račun prosti imunoglobulinov FAB-fragmentov. Vizualno je to izraženo pojav aglutinacije za Staphylococcus. Uporaba reakcije koagglyutinatsii obetaven za hitro zaznavanje bakterijskih antigenov v krvi, cerebrospinalni tekočini, sputum in drugega materiala.
V laboratorijskem praksi uporablja tudi Coons Postopek imunofluorescenčni pri uporabi fluorescentno molekule barvila vezan na protitelo, antigen protitelo reakcija postane viden v fluorescenčnim mikroskopom. Za razliko od drugih serološke teste, ko se povezava antigena s protitelesom ocenjevala sekundarnega učinka, ki ga (aglutinacijski, padavine, itd) povzročila, imunofluorescenčni tehnika omogoča opazovanje reakcija poteka in zato ocenili prisotnost in lokalizacije antigena.
Trenutno velika distribucija postane imuno-encimska metoda ima visoko občutljivost in prilagodljivost. Ta metoda temelji na določitvi antigena z imuno
sorbent povezana z encimom. Takšno reakcijo med antigenom in protitelesom imel ime ELISA (enzymelinked imunski test). Na primer, če je to potrebno za odkrivanje antigena v celici z ustreznimi homolognih protiteles lahko kovalentno vezan z encimskim protitelesa in to protitelo nato označeno z encimom, da reagira z antigenom.
Najbolj občutljiva in omogoča odkrivanje vsebnosti nizke antigen (0,5 ng / ml) - radioimunski metoda pa zahteva posebno opremo.
Te metode imajo več prednosti pred bakteriološke. Ta metode hitre diagnostike ki omogočajo, da se določijo antigene patogenov v nekaj minutah ali urah. Kljub uničenje bakterij po teku vzročno zdravljenje, lahko antigeni patogenov v telesu še za 3 do 4 tedne in odkriti s temi metodami. Kljub temu pa je treba opozoriti, da obstaja širok antigenski razmerje med rodov in vrst, v vsaki družini bakterij in celo med različnimi družinami. To lahko privede do lažno pozitivnih rezultatov. Določitev bakterijskih antigenov ne določa nagnjenost k antibiotike, ki prav tako zmanjšuje vrednost teh metod.
Serološki testi, namenjeni iskanju specifičnih serumskih protiteles bolnikov z bakterijskimi okužbami, ki se uporabljajo za proizvodnjo retrospektivni diagnozo, ko so na pozitiven do konca 1-2 tednih bolezni. V prihodnosti, njihov titer običajno poveča, kar je diagnostično zelo pomemben kazalnik. Zato je treba serološke teste ponoviti v intervalih 5-10 dni. Reakcije so pozitiven, v primeru, da je njihov titer povečal za ponavljajoče študiji je 4-krat ali več. Vendar dolgotrajno bolezen (bruceloza, tularemijo, kronična pljučnica) dinamika serološki manj prepoznavna, zato moramo zanesti na višino titer protiteles. Diagnostična vrednost so samo nekatere koncentracije protiteles. Na primer, titer vrednost 1 za diagnozo črevesnih okužb v Rigi: 320-1: 640 in več (salmoneloza, griže). Treba je upoštevati epidemiološko situacijo na tem področju in da se upošteva "normalno" raven protiteles v zdravi populaciji. V Phragmites, ki se uporablja za iskanje protiteles z adsorpcijo na eritrocite imunoglobulini ne uporabljajo, in polisaharida ali proteina antigensko snov. Ta diagnostična orodja imenujemo antigenski eritrocitov. Poleg aglutinacije reakcije v diagnostiki bakterijskih infekcij z uporabo DGC posredno hemolize reakcijo, reakcijo indirektno imunofluorescenco, posredno encimskim imunotestom, nevtralizacije reakcije in drugi serološkimi metodami.
Serološki testi imata samo relativen zanesljivost, saj lahko pride do nespecifičen ali pozitiven pri bolnikih, ki so bile opravljene ustrezne okužbe v preteklosti (anamnestićnih odzivnosti), kot tudi pri sprejemanju cepljenja (reakcija cepljenja) preventivno. Za bolj objektivno oceno rezultatov seroloških testov uporablja diferencirano študijo protiteles različnih fizikalno-kemijskih lastnosti. Protitelo iz istega imunološkega specifičnosti lahko pripadajo različnim razredom imunoglobulinov in s tem kakovostno drugačno funkcionalno aktivnost. To protitelesa fizikalno-kemijske Tip določi vrsto in intenzivnost jo povzročajo imunološke reakcije, kot so lizi, aglutinacijo, nevtralizacijo toksičnih in antigenske lastnosti, ki je antigen biološki pomen reakcije - protitelesa. Trenutno razlikovati pet glavnih vrstah humane imunoglobuline: Ig G, Ig M, Ig A, Ig D in Ig E. V reakcij primarne vloge humoralno imunost spada v prvih treh razredih. V akutne infekcijske bolezni v zgodnjih fazah imunskega odziva serumskega določi prvo start makroglobulinovye z Ig M 19S sedimentacijski konstantna in nato pozneje pojavijo gama globulin protitelesa razred G z sedimentacijske konstantnih 7S. Nato 78 protitelo prevladujejo in 198-sintezo protiteles je kratkotrajna. Zdravljenje krvnega seruma reducentov (2-merkaptoetanol, cistein, itd) povzroči selektivna inaktivacije Ig M, brez vpliva na Ig G. protiteles titer določi v serumih po obdelati redukcijsko sredstvo ustreza številki 78 protitelesa. Določanje protiteles različnih fizikalnih in kemijskih lastnosti pomaga določiti fazo bolezni, infekcijske bolezni razlikovati od anamnestični reakcije, pri kateri so v glavnem posledica 198 protiteles identificirane bacillicarriers kronično tifusu ko je sinteza moten 198 protitelesa in protitelesa proti prevladujejo 78.
Navzkrižne reakcije, povezane s prisotnostjo skupnih antigenov med različnimi bakterijami, seveda, ovira pravilno razlago serološke študije. Vendar pa je s študijem na dinamiko, ki vozijo protiteles in določanje različnih vrst možnih imunoglobuline vzpostaviti pravo naravo bolezni. Serološke študije pomagajo razjasniti klinično diagnozo in okužb, ki jih oportunistične bakterije, potrjujejo svojo vlogo v etiologiji bolezni s pozitivnimi bakteriološke ugotovitev, še posebej v primerih, ko je raziskava, ki se izvajajo v ozadju pa antimikrobne terapije. Serološke metode v laboratoriju, so drugotnega pomena in ne more nadomestiti bakteriološko preiskavo. Kompleks mikrobiološke raziskave omogoča, da določite syndromological klinično diagnozo in ugotoviti vzrok teh bolezni, ki imajo polietiologichesky naravo. Potreba po takšnih raziskav zaradi svoje pomembne vloge v diferencialno diagnostiko nalezljivih bolezni in namerno izbiri zdravljenja vzročno.